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* 兔金屬蛋白酶組織抑制因子-1 (TIMP-1)ELISA檢測試劑盒 北京

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更新時間:2016-08-29 01:52:53瀏覽次數:302次

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1. 37℃恒溫箱。
2. 標準規格酶標儀。
3. 精密移液器及一次性吸頭
4. 蒸餾水,
5. 一次性試管
6. 吸水紙
注意事項
1. 從2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2. 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差
3. 建議所有標準品、樣本都做雙份檢測。
4. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
5. 為避免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。
6. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
7. 底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。
自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中
標本要求
1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
操作程序
1. 分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準品孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品孔中加入標準品50μl;在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。輕輕晃動混勻,37℃溫育60分鐘。
2. 棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復5次,拍干。
3. 每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
4. 取出酶標板,每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
5. 測定:以空白孔調零,在450nm波長下測量各孔的吸光度值(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
6. 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了的,其實際濃度應該乘以總稀釋倍數。
操作程序總結:
準備試劑,樣品和標準品
加入準備好的樣品、標準品和酶標試劑,37℃反應60分鐘
洗板5次,加入顯色液A、B,37℃顯色15分鐘
加入終止液
15分鐘之內讀OD值
計算

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