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實驗方法原理:人肺耐藥蛋白(LRP)ELISA試劑盒
T 細胞在體外培養時,受到非特異性有絲分裂原(如PHA、ConA)刺激后,可出現細胞體積增大,代謝旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母細胞轉化。淋巴細胞轉化率的高低可以反映機體的細胞免疫水平,因此可作為測定機體免疫功能的指標之一。淋巴細胞轉化試驗有形態計數法、MTT 法和同位素法三種。MTT 法即四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法。MTT 是一種噻唑鹽,化學名3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-
試劑、試劑盒:人肺耐藥蛋白(LRP)ELISA試劑盒
1. RPMI1640 培養液2. Hank’s 液3. 刀豆蛋白A(Concanvalin A, ConA),用RPMI1640 液配成1mg/ml,分裝小瓶,冷凍保存4. MTT 1mg/ml5.
實驗步驟:人肺耐藥蛋白(LRP)ELISA試劑盒
1. 小鼠脾細胞懸液的制備:取一個滅菌的平皿,加入5ml Hank’s液。頸椎脫臼法處死小鼠,取脾臟,放入平皿中,在鋼網上研磨并過篩,制成細胞懸液。取出100μl用于計數。將其余細胞懸液移入一離心管中,離心1500rpm,7min,(或1000rpm,10min)棄去上清,用RPMI1640 培養液稀釋,制成2.5×106 / ml的脾細胞懸液,然后加入ConA使每孔zui終濃度為2μg/ml,同時做不加ConA的陰性對照孔。2. 將上述細胞懸液加入96 孔平底培養板中,每孔0.1ml。3. 將培養板放入含有5%CO2的37℃培養箱中培養48-72 小時,在培養結束前4-6 小時,于培養板各孔內加入1mg/mlMTT液,10μl/孔。37℃培養6 小時。4. 各孔內加入0.01M 鹽酸—異丙醇110μl,30 分鐘內(或加2%SDS 100ul/孔,過夜)用酶標測定儀測OD 值,測定波長570nm。5. 實驗結果將實驗組和對照組三個復孔的OD 值平均。轉化值=實驗組的平均OD 值-對照組的平均OD 值。 注意事項 1. 由于本實驗需要培養3 天,才能觀察結果。因此,在操作時應注意無菌操作,避免細菌污染,導致實驗的失敗。2. 細胞操作要輕柔、迅速,以免細胞損傷影響實驗結果。
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