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    大鼠胱硫醚β-合酶(CBS)ELISA Kit Rat CBS ELISA Kit

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    更新時間:2018-01-24 00:49:33瀏覽次數:545次

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    產品簡介

    大鼠胱硫醚β-合酶(CBS)ELISA Kit Rat CBS ELISA Kit
    種屬: Rat
    其他種屬: Human
    待測物名稱: cystathionine-beta-synthase
    檢測范圍: 31.25 pg/ml-2000 pg/ml
    靈敏度: 7.8 pg/ml

    詳細介紹

    別名:HIP4, OTTHUMP00000109415|OTTHUMP00000109416|OTTHUMP00000109418|beta-thionase|cystathionine beta-synthase|methylcysteine synthase|serine sulfhydrase

    蛋白功能1:Biosynthesis/Metabolism

    蛋白功能2:Amino-acid biosynthesis and metabolism

    蛋白功能3:Amino-acid biosynthesis

    大鼠胱硫醚β-合酶(CBS)ELISA Kit      

     

    【預期應用】ELISA 法定量測定血清、血漿、細胞培養物上清、組織裂解液中胱硫醚β-合酶(CBS))     含量。

    【產品性能指標】

    1、檢測范圍:15.6 pg/ml-1000 pg/ml

    2、靈敏度:3.9 pg/ml

    3、精密度:批內差CV%<8%,批間差CV%<10%

    大鼠胱硫醚β-合酶(CBS)ELISA Kit     【實驗原理】

    用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗胱硫醚β-合酶(CBS))     抗體的微孔中依次加入標本或標準品、

    *化的抗胱硫醚β-合酶(CBS))     抗體、HRP 標記的親和素,經過*洗滌后用底物TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣本中的胱硫醚β-合酶(CBS))     呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣本濃度。

    大鼠胱硫醚β-合酶(CBS)ELISA Kit      【試劑盒組成成分】

    組份48T/96T

    酶標板 (Assay plate) 12 ×8

    標準品 (Standard) 2 (凍干品)

    *標記抗體 (Biotin-antibody) 1 x 120 μl/(100×)A

    辣根過氧化物酶標記親和素 (HRP-avidin) 1 x 120 μl/(100×)

    *標記抗體稀釋液 (Biotin-antibody Diluent) 1 x 15 ml/

    辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent) 1 x 15 ml/

    * (Sample Diluent) 1 x 50 ml/

    濃洗滌液 (Wash Buffer) 1 x 20 ml/(25×)

    底物溶液 (TMB Substrate) 1 x 10 ml/

    終止液 (Stop Solution) 1 x 10 ml/

    板貼4

    大鼠胱硫醚β-合酶(CBS)ELISA Kit      【所需試劑和器材】

    標準規格酶標儀;高速離心機;電熱恒溫培養箱;干凈的試管和離心管;容量瓶;

    系列可調節移液器及吸頭;多通道移液器;蒸餾水等

    大鼠胱硫醚β-合酶(CBS)ELISA Kit      【樣本采集及保存】

    1、血清:全血標本請于室溫放置2 小時或4°C 過夜后于2 - 8°C 1000 x g 離心15 分鐘,取

    上清即可立即檢測;或進行分裝,并將標本放于-20°C -80°C 保存,但應避免反復凍融。

    解凍后的樣品應再次離心,然后檢測。

    2、血漿:可用EDTA 或肝素作為抗凝劑,標本采集后30 分鐘內于2 - 8°C 1000 g 離心15

    分鐘,取上清即可立即檢測;或進行分裝,并將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反

    復凍融。解凍后的樣本應再次離心,然后檢測。

    3、細胞培養物上清:標本于2 - 8°C 1000 x g 離心15 分鐘取上清,上清立即用于實驗,或

    分裝后于-20°C -80°C 保存。避免反復凍融。

    4、組織裂解液:取100mg 組織,用1X PBS 洗去血污。剪成小塊放入組織研磨器(勻漿管)中,加入1 ml 1X PBS,制成勻漿,然后置于-20°C 過夜。經過反復凍融2 次處理破壞細

    胞膜后,將組織勻漿于2 - 8°C 5000 g 離心5 分鐘取上清。取適量上清液立即進行實驗,

    或將上清分裝保存于-20°C -80°C 。解凍后的樣本應再次離心,然后檢測。避免反復凍

    融。

    注:標本溶血會影響zui后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

    【試劑配制】

    1、 標準品

    (1) 從試劑盒中取出一支標準品,于6000-10000rpm 離心30 秒。用1ml *溶解,并

    用吸頭對準凍存管底部反復吸打5 次以助溶解,充分混勻得到標準品S7,放置備用。

    (2) 7 1.5 ml 離心管(S0-S6)依次排列,各加入250μl *。吸取250μl 標準品

    S7 到*個離心管中(S6),輕輕吹打混勻。從S6 中吸取250μl 到第二個EP 管中(S5),

    輕輕吹打混勻。以此類推進行標準品的倍比稀釋。S0 為*。

    2、 洗液工作液

    濃洗滌液按1:25倍用去離子水進行稀釋。例如用量筒量取240ml去離子水,倒入燒杯或其

    他潔凈容器中,再量取10ml濃洗滌液,均勻加入,攪拌混勻,在臨用前配妥。濃洗滌液低溫保

    存會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。

    3、 *標記抗體工作液

    *標記抗體液按1:100倍用*標記抗體稀釋液進行稀釋。如10μl*標記抗體加

    990μl*標記抗體稀釋液,輕輕混勻,在臨用前10分鐘內配妥。

    4、 辣根過氧化物酶標記親和素工作液

    辣根過氧化物酶標記親和素按1:100倍用辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液進行稀釋。如

    10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液,輕輕混勻,在臨用

    10分鐘內配妥。

    大鼠胱硫醚β-合酶(CBS)ELISA Kit      【重要提示】

    1、實驗開始前,請提前配置好所有試劑。試劑或樣本稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起

    泡。

    2、用戶在初次使用試劑盒時,應將各種試劑管離心數分鐘,以便管蓋和管壁上的液體集中到

    管底。

    3、在配制標準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。

    4、 因實際裝量多于標示裝量,配制工作試劑請用精準的計量工具(移液器或量筒等)量取,

    切勿不經量取直接使用。

    5、標準品、*標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液稀釋前根據預先計算

    好的每次實驗所需的總量配制,實際配制時應多配制0.1-0.4ml。請勿重復使用已稀釋過

    的標準品、*標記抗體工作液、或辣根過氧化物酶標記親和素工作液。

    6、標準品的稀釋請勿于板中進行,標準品應于臨用前15 分鐘內配制。為保證實驗有效性,

    建議每次實驗使用新的標準品。若保存得當,溶解后的標準品S7 可在2-8℃保存,7 天內

    使用有效。

     

     

    大鼠胱硫醚β-合酶(CBS)ELISA Kit      【操作步驟】

    1、將各種試劑移至室溫(18-25℃)平衡至少30 分鐘,按前述方法配制試劑,備用。

    2、加樣:分別設標準品孔、待測樣本孔。每孔分別加標準品或待測樣本100μl,輕輕晃動混

    勻,覆上板貼,37℃溫育2 小時。

    3、棄去液體,甩干,不用洗滌。

    4、每孔加*標記抗體工作液100μl,覆上新的板貼,37℃溫育1 小時。

    5、棄去孔內液體,甩干,洗板3 次。每次浸泡2 分鐘,200μl/每孔,甩干。

    6、每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液100μl,覆上新的板貼,37℃溫育1 小時。

    7、棄去孔內液體,甩干,洗板5 次。每次浸泡2 分鐘,200μl/每孔,甩干。

    8、依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色15-30 分鐘。

    9、依序每孔加終止溶液50μl,終止反應。

    10、在反應終止后5 分鐘內用酶標儀在450nm 波長依序測量各孔的光密度(OD 值)。

    大鼠胱硫醚β-合酶(CBS)ELISA Kit      【操作要點】

    1、為保證檢測結果的準確性,建議標準品及樣本均設雙孔測定。每次檢測均需做標準曲線。

    2、如標本中待測物質含量過高,請先用*進行稀釋,以使樣本符合試劑盒的檢測范

    圍,zui后計算時再乘以相應的稀釋倍數。

    3、 加樣:加樣時,請使用一次性的潔凈吸頭,避免交叉污染。加樣時應盡量輕緩,避免起泡,

    將樣本加于酶標板孔底部,切勿沿孔壁加樣。一次加樣時間控制在10 分鐘內,如標

    本數量多,*使用移液器加樣。

    4、 溫育:為防止樣本蒸發或污染,溫育過程中酶標板必須覆上板貼,實驗過程中酶標板應避

    免處于干燥的狀態。溫育過程中應隨時觀察溫箱溫度是否恒定于37℃,及時調整。溫育

    過程中,溫箱不易開啟太多次,以免影響溫度平衡。

    5、 洗滌:洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。

    (1) 手工洗板方法:吸去(不可觸及孔壁和孔底)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪

    墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將*的洗滌緩沖液按200μl/孔注入孔內,

    浸泡2 分鐘。根據操作步驟中所述,重復此過程數次。

    (2) 自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

    6、 顯色:為保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。可在加入底物溶

    液后每隔一段時間觀察一下顯色情況以控制反應時間(比如每隔10 分鐘)。當肉眼可見標

    準品前3-4 孔有明顯梯度藍色,后3-4 孔顯色不明顯時,即可加入終止液終止反應,此時

    藍色立刻變為黃色。終止液的加入順序應盡量與底物溶液的加入順序相同。

    7、底物溶液應為淺藍色或無色,如果顏色嚴重變深則必須棄用。底物溶液易受污染,請避光

    妥善保存。

    大鼠胱硫醚β-合酶(CBS)ELISA Kit      【數據處理】

    可將標準品及樣本值減去S0 孔數值后繪制曲線,如果設置復孔,則應取其平均值計算。以標

    準品的濃度為縱坐標(對數坐標),OD 值為橫坐標(對數坐標),在對數坐標紙上繪出標準曲

    線。*使用專業制作曲線軟件進行分析,可從我們的下載專業軟件"Curve Expert 1.3",

    并根據提示制作標準曲線。根據樣本OD 值,由標準曲線查出相應的濃度;或用標準品的濃度

    OD 值計算出標準曲線的回歸方程式,將樣本的OD 值代入方程式,計算出樣本濃度。若樣

    本檢測前進行過稀釋,zui后計算時需乘以相應的稀釋倍數,即為樣本的實際濃度。

    大鼠胱硫醚β-合酶(CBS)ELISA Kit      【說明】

    1、本試劑盒僅供研究使用。

    2、中、英文說明書可能會有不*之處,請以英文說明書為準。

    3、本操作說明也適用于48T 試劑盒。48T 試劑盒中酶標板、標準品、*標記抗體及辣根

    過氧化物酶標記親和素數量減半。

    4、不同批號試劑不能混用。不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。

    5、剛開啟的酶標板孔中可能會含有少許水樣物質,此為正?,F象,不會對實驗結果造成任何

    影響。

     

    上海逸研生物科技有限公司專業從事于elisa試劑盒的銷售及elisa待測服務,代理國內外的elisa試劑盒,并自主研發常規elisa試劑盒,質量*,*,歡迎廣大客戶和訂購,代理品牌:RD代理、eBioscinece代理、biovision代理、華美CUSABIO代理、優爾生代理、博士德代理等。

     

     

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