NCI-H460細胞,大細胞肺癌細胞
【研究范圍】僅供科研使用
【細胞特征】每兩到三天進行換液。細胞應當在融合前傳代
【細胞培養表述】
一、態觀察。細胞膜是每天必須觀察的,看是否清晰,細胞的死亡往往是從細胞膜的破裂開始的,早期的表現就是細胞膜某一點出現欠完整或者毛發影。
二、細胞往往會有“抱團”現象,抱團生長或死亡,個人認為應該勤換液或傳代,盡量避免細胞抱團。
三、長迅速,強烈建議用較大的培養瓶養,用小瓶養的話,換液不及時,很容易死亡。細胞的生長速度一般為2天左右就需要傳代,并且一般為一傳三,或一傳四。
四、培養液:1640培養液,1L一般加*2g,并加雙抗,胎牛血清濃度*為12%,zui低不低于10%,細胞對胎牛血清高度依賴。培養液PH應調為7.20-7.40之間。
五、防污染。細胞生長迅速,較少發生污染,但常規措施應該做好。比如無菌操作,酒精消毒等,培養瓶口建議過火,包括瓶蓋,應過火4秒左右。
六、凍存。-20一小時,-80一夜,液氮*保存。強烈建議液氮*保存,盡量不要在-80*保存,死亡率很高。
七、復蘇。調節水浴箱溫度為42℃,并提前在試管內放置10倍培養液,使培養液溫度與室溫*。1分鐘內融化細胞(禁止搖晃凍存管),移取至試管內,動作要輕,從試管管底開始慢慢上提移液管,使細胞在培養液內分布均勻,離心,洗2次。
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