大鼠可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒
人白介素3(IL-3)ELISA試劑盒操作步驟
1. 包被抗原:用包被液將抗原作適當稀釋, 一般為1~10微克/孔,每孔加200微升,37℃溫育1小時后,4℃冰箱放置16~18小時。
2. 洗滌:倒盡板孔中液體,加滿洗滌液,靜放三分鐘,反復三次,zui后將反應板倒置在吸水紙上,使孔中洗滌液流盡。
3. 加封閉液200微升,37℃放置一小時。
4. 洗滌同2。
5. 加被檢血清:用稀釋液將被檢血清作幾種稀釋,,每孔200微升。同時作稀釋液對照。37℃放置2小時。
6. 洗滌同2。
7. 加辣根過氧化物酶羊抗兔IgG, 每孔200微升, 放置37℃ 1小時。
8. 洗滌同2。
9. 加底物:鄰苯二胺溶液加200ml,室溫暗處10--15分鐘。
10. 加終止液:每孔50微升。
11. 觀察結果:用酶聯免疫檢測儀記錄490nm讀數。
大鼠可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒
HRP除符合上述的ELISA中標記酶的要求外,更有價格低廉和性質較穩定的特點。值得注意的是,在選用酶制劑時,除其純度RZ外,更應注意酶的活力。高純度的酶如保存不當,活力也會降低。酶制劑的活力以所含的酶活力單位表示,可用對底物作用后生成產物量的測定進行試驗。
國外很多ELISA試劑采用堿性磷酸酶(AP)作為標記酶。常用的AP有兩個來源,分別從大腸桿菌和小牛腸膜中提取。不同來源的酶生化特性特性略不相同,從大腸桿菌中提取的AP分子量為80000,酶作用的pH為8.0;用小牛腸膜中提取的AP分子量為100000,zui適pH為9.6。在ELISA中,AP系統的敏感度一般高于HRP系統,空白值也較低,但AP價格昂貴,制備結合物所得率也較HRP低。
大鼠可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒
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