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ELISA試劑盒*或親和素與抗體分子或標記物結合后,既不影響前者的親和力,也不改變后者的特性。親和素分子的4個活性部位并非都和連接在抗體分子上的*殘基結合,剩下的游離部位尚可作為另一種*標記蛋白質的受體。這些特點就是BAS免疫標記技術的基礎和原理。
ELISA試劑盒BAS基本檢測方法可分為兩大類,一類以游離親和素居中,分別連接*化大分子反應體系和標記*,稱為BAB法或橋聯親和素*法(bridged avidin biotintechnique,BRAB),其改良法稱為(avidinbiotin complex,ABC)法。另一類以標記親和素連接*化大分子反應體系,稱為BA法或標記親和素和*法(LAB)?,F分別介紹如下:
1.BA法亦稱LBA法。系將特異性抗體*化,將酶分子標記在親和素分子上,*化抗體與被檢抗原結合后,再借BAS的高度親和力將酶分子聯結到抗原分子上,經酶促反應即可檢出抗原。
2.BAB法亦稱BRAB法。系將特異性抗體*化,將酶分子標在*上,然后以游離親和素橋聯物,使被檢抗原、*化抗體和酶標*聯成一體。
3.ABC法原理與BAB法基本相同,只是親和素和酶標*需要先按一定比例形成ABC復合物,這種網絡結構結合了大量的酶分子,當親和素尚未被酶標*飽和時,*化抗體即可與之結合。BASELISA的三種基本檢測法。
ELISA試劑盒上述方法中,如將第二抗體*化,即為間接法。由于間接法增加了一級抗原抗體反應,因而比直接法更敏感,應用范圍更廣。近年來許多學者對上述基本方法進行了改良,有人用親和素抗體或A蛋白作橋聯物。另外還發展了BAELISA競爭法和抑制法等。
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