蛋白質電轉實驗步驟
1. 剪6塊3 MM 濾紙和一塊NC膜。
2. 將剪好的3 MM 濾紙和NC膜在轉移緩沖液中浸泡3-5分鐘。
3. 按下列過程安裝轉移裝置,將塑料支架平放在含轉移緩沖液的托盤中,在塑料支架上放一塊海綿。
4. 將3塊3MM濾紙對齊放在海綿上,然后依次將NC膜、凝膠、及另3塊慮紙和海綿放上。
5. 用塑料支架夾緊上述各層,放入電轉移槽內,NC膜一側向正極,凝膠一面向負極。
6. 接通電源電壓120 mA,轉移6小時以上或過夜。
7. 轉移結束后,取出塑料支架,依次取掉各層,用鉛筆在膜的上沿作好標記,切下其中一個孔所對應膜的一半,用氨基黑或考馬士亮蘭染色,檢查轉移效果。
8. 將其余的NC膜放在一張干凈的3 MM 濾紙上,室溫干燥30~60分鐘(可不做)。
1. 慮紙及膜的大小不應大于待轉移膠的大小,否則在轉移過程中會發生短路,影響轉移效果。
2. 操作中應戴手套,切不可用手直接觸摸,因手上的汗和分泌物將直接影響到蛋白從膠向膜的轉移。
3. 放置NC膜和濾紙時,每層之間不應有氣泡,否則將影響轉移效果。
4. 待轉移蛋白分子量決定轉移時間,分子量大,轉移時間長,反之則小。
蛋白質電轉實驗步驟