快捷植物基因組 DNA 提取試劑盒

Plant Genomic DNA Kit

For Research Use only

僅供研究用

貨號：QYS-ZP310

離心柱型 100T/50T

產品簡介：

本試劑盒采用可以特異性結合DNA的離心吸附柱和*的緩沖液系統，用于提取植物細胞中的基因組DNA。離心吸附柱中采用的硅基質材料為本公司*新型材料，、專一吸附DNA，可大限度去除植物細胞中雜質蛋白及其他有機化合物。提取的基因組DNA片段大，純度高，質量穩定可靠。使用本試劑盒回收的 DNA 可適用于各種常規操作，包括酶切、PCR、文庫構建、Southern 雜交等實驗。

提取得率：

注：不同來源的植物組織材料中提取的 DNA 的量會有差異

試劑盒組成：

儲存條件：

試劑置于室溫（15–25℃）干燥條件下可保存 12 個月；更長時間的保存可置于 2-8℃。

產品特點：

簡單快速：一小時內即可獲得超純的基因組 DNA。

超 純：獲得的 DNA 可直接用于 PCR、酶切、雜交等分子生物學實驗。

注意事項：請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。

1． 樣品應避免反復凍融，否則會導致提取的 DNA 片段較小且提取量也下降。

2． 若植物緩沖液 A 和 B 中有沉淀，可在 65℃水浴中重新溶解，并搖勻后使用。

3． 所有的離心步驟都為使用臺式離心機在室溫下進行。

操作步驟：

使用前請先在漂洗液 W2 中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。

• 處理材料：

取植物新鮮組織 100 mg 或干重組織 20 mg，加入液氮充分碾磨。加入 400μl 緩沖液 S 和 6 μl RNase A(10 mg/ml)，旋渦振蕩 1 分鐘，室溫放置 10 分鐘。

• 加入 200 μl 緩沖液 G，充分混勻，旋渦振蕩 1 分鐘。
• 12,000 rpm(~13,400×g )離心 5 分鐘，將上清移至新的離心管中。
• 加入 200μl 異丙醇，顛倒混勻，此時可能會出現絮狀沉淀。
• 將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個吸附柱中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm(~13,400×g )離心 30 秒，倒掉廢液，吸附柱放入收集管中。
• 向吸附柱中加入 700 μl 漂洗液 W2（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm(~13,400×g )離心 30 秒，倒掉廢液，將吸附柱放入收集管中。注意：如果吸附柱膜呈現綠色，向吸附柱中加入 500μl 無水乙醇，12,000rpm(~13,400×g )離心 30 秒，倒掉廢液，將吸附柱放入收集管中。
• 向吸附柱中加入 500 μl 漂洗液 W2，12,000 rpm(~13,400×g )離心 30 秒，倒掉廢液。
• 將吸附柱放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2 分鐘，倒掉廢液。將吸附柱置于室溫放置數分鐘，以*晾干吸附材料中殘余的漂洗液。注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會影響后續的酶反應（酶切、PCR 等）實驗。
• 將吸附柱轉入一個干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加 50-200 μl洗脫緩沖液 TE，室溫放置 2-5 分鐘，12,000 rpm(~13,400×g )離心 2 分鐘，將溶液收集到離心管中。

注意：為增加基因組 DNA 的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱 中，室溫放置 2 分鐘，12,000 rpm (~13,400×g )離心 2 分鐘。洗脫緩沖液體積不應少于 50 μl，體積過小影響回收效率。洗脫液的 pH 值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液應保證其 pH 值在 7.0-8.5 范圍內(可以用 NaOH 將水的 pH 值調到此范圍)，pH 值低于 7.0 會降低洗脫效率；且 DNA 產物應保存在-20℃，以防 DNA 降解。

DNA 濃度及純度檢測

• 得到的基因組 DNA 片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關?；厥盏玫降?DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。
• DNA 應在 OD260 處有顯著吸收峰，OD260 值為 1 相當于大約 50 μg/ml 雙鏈DNA、40 μg/ml 單鏈 DNA。
• OD260/OD280 比值應為 1.7–1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會偏低，因為 pH 值和離子存在會影響光吸收值，但并不表示純度低。