結腸癌轉基因細胞；RKO-AS45-1 返回列表頁

公司細胞廣泛用于國內院校的細胞生物學研究，作為實驗項目研究。下列產品詳細介紹：

細胞名稱  結腸癌轉基因細胞；RKO-AS45-1
形態特性: 上皮細胞

生長特性: 貼壁生長

特征特性: 人的cDNA中編碼GADD45的開放閱讀框到表達載體pCMV.3中，轉染結腸癌細胞RKO，建立了RKO-AS45-1細胞株。該細胞含有穩定整合巨細胞病毒（CMV）啟動子的表達載體。RKO-AS45-1細胞系和它的母系RKO一起可用于Gadd45對DNA修復、凋亡和藥物敏感性研究。

培養條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優質胎牛血清，10%

傳代方法: 消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。

傳代情況: PN5

凍存條件: 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS

支原體檢測: 陰性
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冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率； 
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
Colletotrichum fioriniae (Marcelino et Goul ..細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株；MA-1G2 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

frozen細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株；14E4 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

frozen細胞名稱: 中國倉鼠卵巢細；胞CHO-S/K7OE10-1D6 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Methanococcus sp.細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株；11A7 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

freeze-dried細胞名稱: 中國倉鼠卵巢細胞；CHO-S/H9C2 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 小鼠潘氏細胞雜交瘤細胞株；GCLP MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Agaricus bisporus (Lange) Imbach, teleomorph細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株；4-1 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Homo sapiens, human細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株；VZV-gE-4A2 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株；12H11 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 小鼠骨髓雜交瘤細胞株；8A3A10 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株；PITPNM3mAb MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Corynebacterium ammoniagenes (Cooke and Kei ..細胞名稱: 小鼠骨髓雜交瘤細胞株；3G12 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Homo sapiens, human細胞名稱: 小鼠骨髓雜交瘤細胞株；2F8 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Homo sapiens, human細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株；6H7D11 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Homo sapiens, human細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株；WV-TT-05 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Homo sapiens, human colon細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株；WV-SPA-03 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
結腸癌轉基因細胞；RKO-AS45-1人庚型肝炎病IgM(HGV-IgM)ELISA試劑盒sRANKLELISAKit產品規格:48T/96T。

人乙型肝炎病前S2抗原(HBVpreS2Ag)ELISA試劑盒SRBELISAKit產品規格:48T/96T。

人乙型肝炎病前S2抗體(HBVpreS2Ab)ELISA試劑盒SRELISAKit產品規格:48T/96T。

人內皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA試劑盒SRF/IFELISAKit產品規格:48T/96T。

人脂蛋白脂酶(LPL)ELISA試劑盒SRPELISAKit產品規格:48T/96T。

人細胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒ssDNAELISAKit產品規格:48T/96T。

人內皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA試劑盒SSELISAKit產品規格:48T/96T。

人內素(ET)ELISA試劑盒SSELISAKit產品規格:48T/96T。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變
化；或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來，吸除細胞消化液。加入含血清的  *細胞培養液，吹打下細胞，即可直接用于后續實驗。
④如果發現消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發現細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落， 直接用細胞培養液把細胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細胞，盡量去除細胞消化液后，加入含血清的*培養液重新懸浮細胞，即可用于后續實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。