綿羊莫拉菌LAMP試劑盒 返回列表頁

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

參數規格：

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使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR（見下步），每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對數值為橫軸，繪制標準曲線。 
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

4-N-BOC-：200.28Aminopiperidine 4-N-BOC-：73874-95-0 C10H20N2O2

氟氫鉀：78.1Potassium fluoride：7789-29-9 KHF2

二水醛縮乙二胺鈷：325.23Two salicylaldehyde ethylenediamine cobalt：14167-18-1 C16H14CoN2O2

2-氯-4-硝-a-L-巖藻糖苷2- -4- -a-L- fucoside nitrobenzene chloride：319.7 C12H14ClNO7：157843-41-9

氯硝四氮唑藍（NBT）Nitro blue tetrazolium chloride (NBT)：817.6 C40H30N10O6 · 2：298-83-9

3-羧三氟硼酸鉀：3- carboxy phenyl three kbf4：850313-91-6 C7H5BF3KO2

丙諾龍Nandrolone phenylpropionate：406.56C27H34O3：62-90-8

2-氯-3,5-二硝三氟甲：270.552- -3,5- two nitro three f：392-95-0 C7H2ClF3N2O4

十八烷：330.59Eighteen benzene：929727 C24H42

綿羊莫拉菌LAMP試劑盒人 IGLL1 基因全長ORF克隆

人 IL36A / IL1F6 基因全長ORF克隆

小鼠 CD27 / TNFRSF7 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

大鼠 CD89 / FCAR 基因全長ORF克隆

人 CD64 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

人 SGK1 / SGK 基因全長ORF克隆

小鼠 CDK5 基因全長ORF克隆

人 ADM / Adrenomedullin 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 OMG / OMGP (aa 1-245) 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

甲型流感 H1N1 (A/New York/18/2009) HA 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

重組人 HBEGF / DTR 蛋白

人 PEX26 基因全長ORF克隆