1998年Winston等 建立了頂空氣相色譜測定生物組織總氧自由基清除能力(total xyradical scavengingcapacity,TOSC)的方法。我們引用該方法并做了一定改進,先后用于小鼠組織、中草藥和抗氧化劑的TOSC檢測。現報道13種抗衰老保健食品的檢測結果。
1 材料與方法
I.I 儀器和試劑:氣相色譜儀(島津GC-4B),20mL硬質頂空瓶(Agilent公司),恒溫振蕩水浴箱(上??破鞴荆?,2‘-偶氮雙(2一脒基丙烷)二鹽酸鹽(ABAP)(日本WakoChemical公司),4-甲硫基-2-丁酮酸鈉鹽(KMBA)(Sig-ma公司),其他試劑均為國產分析純。
1.2實驗原理:在密閉頂空瓶內熱解ABAP產生大量氧自由基,攻擊KMBA產生乙烯;抗氧化劑與KMBA競爭氧自由基能減少乙烯的產生,從乙烯的減少量計算所測樣品的TOSC值。
1.3 色譜條件:GDX-502玻璃填充柱(2 m ×3 mm i.d.);進樣器、色譜柱、檢測器溫度分別為150,60和200℃;載氣(N:)、氫氣、空氣流速分別為40,50和500 mL/min;檢測器為火焰離子化檢測器(FID)。
1.4 TOSC測定:以0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)配制0.2 mol/LABAP、0.25 mmol/LKMBA(均為臨用時現配,4℃ 避光貯存),在頂空瓶中加入KMBA 0.8 mL和PBS 0.1 mL作為控制管,加入KMBA 0.8mL和樣液0.1 mL作為樣品管,分別加蓋密封后用注射器注入0.1 mLABAP,使溶液終體積為1mL。將頂空瓶放人35℃水浴振蕩反應60 min,立即抽取頂空氣體0.6mL按“1.3”節條件進樣。TOSC計算公式為:TOSC=100-(As/Ac )×100(As和Ac分別為樣品管和控制管的乙烯峰面積)。
1.5樣品分析:從市場購置13種保健食品(均注有延緩衰老的作用):口服液8種、片劑3種、膠丸劑2種。將口服液直接用PBS分步稀釋100倍(0.1mL/L);片劑經適當粉碎后用PBS配制成質量濃度為0.1mg/L的樣品溶液;膠丸劑為油劑,先用少量的乙醇溶解,再用PBS在超聲分散下分步稀釋100倍(0.1mg/L)。取上述稀釋后的13種樣品溶液各0.1 mL按“1.4”節條件處理。
2 結果與討論
10份平行樣品測定結果顯示:口服液類TOSC值以太太口服液、柔依口服羊胎精華素、*、太陽神口服液較高;片劑、膠丸類以*片較高(見圖1與表1)。
抗衰老保健食品的抗氧化活性在一定程度上可理解為其對氧自由基的清除能力。從檢測結果來看,TOSC值均大于零,并且存在較大差異,說明13種保健食品均有清除氧自由基的能力。通過TOSC的測定可以區別不同保健食品的抗氧化性能。本法通過乙烯檢測體系的轉換,使得保健食品中所有能與氧自由基起反應的成分均被考慮,反映了被測保健食品總的抗氧化能力,比測定單一成分更為有效。
參考文獻:
[1] WinstonGW,RegoliF,DugasAJ Jr,Fong JH,Blanchard K A.Free RadicalBiology&Medicine,1998,24(3):480
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