頭孢類藥物屬β-內酰胺類抗生素,其抗菌譜廣,抗菌效用強,臨床上屬于一線用藥。該類藥物含量測定方法以液相色譜法居多,但各成一體,沒有一個統一的規范。本實驗采用了因子設計法,流動相采用醋酸鹽緩沖液、乙腈,通過調整pH,以較少的實驗建立了一個較為完善系統的液相色譜方法。應用該法不僅可以有效地同時分離所有的組分,且基本能夠達到基線的分離,有較好的重現性。
1 儀器
島津LC-10Atvp液相色譜儀;色譜柱:YWGC18(10μm4.6mm×250mm);檢測波長:254nm;柱溫:室溫;流速:1.0mL/min;進樣量20μL。
2 試劑與試藥
*、*、*、*、*、*、*、*、*對照品(中國藥品生物制品檢定所),*(市售)。
3 實驗參數和指標
根據各國藥典頭孢類藥物含量測定的文獻數據,以及實驗目的我們選擇了乙腈的3個濃度:8%,10%,12%;pH的3個值:3,4,7;反相離子氫氧化四丁基胺的有無設計了9種流動相系統. 流動相為:醋酸鈉(1.36g→1000mL水)-乙腈(89:11),用冰醋酸調節pH為3.0。各物質問分離度均能達到要求。
5 討論
5.1從9次試驗來看,pH值是影響頭孢類藥物分離的一個重要因素,pH低時分離效果較好。當改變pH時,藥物在流動相中的電離度發生改變,從而改變了保留時間。因此,可通過調節流動相的pH值來調節溶質的電離度以達到調節溶質保留之目的,即“氫離子抑制色譜法”。
5.2*與其他頭孢類藥物的性質差異較大,所以出峰時間較遲,k’較大,如果采用梯度洗脫,效果會更令人滿意。