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上海研盟生物科技有限公司
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上海研盟生物提供美國ATCC傳代細胞株“NCI-H1299細胞,人非小細胞肺癌細胞"，進口來源，國內保種，活性保證，咨詢：.
【友情提示】：產品價格與說明書請添加客服或來電詢價，索要說明書；
產品名稱：NCI-H1299細胞,人非小細胞肺癌細胞
細胞特性
組織來源：肺癌：非小細胞肺癌；轉移灶：淋巴結
培養條件：RPMI-1640 +10% FBS
形 態：貼壁；上皮細胞樣
背 景：這株細胞來源于一個淋巴結轉移，患者接受了初期放療。 細胞均一性的部分缺失p53蛋白，并缺少p53蛋白表達。 細胞可以合成NMB蛋白，而不合成促胃液釋放肽(GRP)。
含量：>1x10的6次方 個/mL
污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
基本特性：
描述：（1）所有細胞株購自ATCC；
（2） 公司可提供新鮮或凍存細胞株；
（3） 細胞株數量約 1000000個/瓶；
（4） 不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌
密度超過90%,并且細胞狀態很好時,則復溫后2個小時需要立即傳代，提供復蘇好的細胞株，貼壁及懸浮細胞形式，細胞狀態良好，飽滿、光澤度好，*，并提供細胞報價、所需培養基、種屬來源、組織來源、形態、背景資料等。
NCI-H1299細胞,人非小細胞肺癌細胞復蘇方法細胞用途：僅供科研使用。
1．從液氮罐中取出安剖；有時因安剖未封嚴，浸入了液氮，取出后因安剖內液氮迅速氣化而發生爆炸，因此應帶有防護眼睛和手套。
2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上蓋并不時搖動，盡快解凍。
3．剪開紗布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，凈化臺上打開蓋，用吸管吸出細胞懸液，裝入離心管中，再補加10ml培養液，吹打使細胞懸浮。
4．低速離心（500～1000轉/分）5分鐘，取上清后再重復用培養液漂洗、離心。
5．加入培養液適當稀釋后，再移裝入培養瓶中，置溫箱培養，次日更換一次培養液后再繼續培養。
我公司認為購買細胞的客戶有培養細胞的經驗，客戶收到細胞，原瓶里的培養液可以收集繼續使用，在*次消化傳瓶時，我們要求客戶留一瓶細胞繼續使用我們的培養液，其它瓶的細胞客戶可使用自己的培養液，這樣可減少由于細胞不適應培養液導致的細胞問題。
來源有保障（世界*品牌），狀態且傳代次數好，經測試不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。每管含有細胞數>1000000個，具有高品質、高純度、高穩定性等特點，純化技術保證產品性能。
運輸方式：活細胞運輸（T-25 flasks）。
細胞純度：95%。
細胞來源：ATCC等。
包裝：內層無菌自封袋，防壓泡沫盒，外層防壓保溫氣泡袋，說明書。
用途：本產品只提供給進一步的科研使用，不可應用于治療等其他方面。
細胞凍存
１．將細胞消化下來，移入離心管離心，棄上清
２．準備凍存液比例：５０％ＦＢＳ＋４０％培養基＋１０％ＤＭＳＯ（現用現配）
３．加１．５凍存液在離心管中，將細胞吹打均勻，移入凍存管內．
放入－２０度冰箱２－４小時后．再放入－８０度冰箱過夜，第二天放入液氮罐保存.
本公司的細胞培養操作規程，供參考
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備DMEM培養基(DMEM，GIBCO，貨號11965-092)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3ml此細胞的培養基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養液后吹勻。
4.移入到事先準備好的含有5ml培養基的T-25培養瓶中或含有14ml培養基的T-75培養瓶中培養。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，先要消化處理并進行細胞計數。消化方法按照細胞傳代方法的1-3步驟進行，zui后的重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數后離心，用血清重懸浮，加DMSO至zui終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。
傳代時間：2-3天 3-5天
傳代比例：1:2~1:3 1:1~1:2
細胞活力：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
細胞實驗安全性：所有細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。收到細胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。
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細胞描述：這株細胞來源于一個淋巴結轉移。 患者接受了初期放療。 細胞均一性的部分缺失p53蛋白，并缺少p53蛋白表達。 細胞可以合成0.1pmol/毫克蛋白的NMB蛋白，而不合成促胃液釋放肽(GRP)。 在本庫通過支原體檢測。 在本庫通過STR檢測。
動物種別：人
組織來源：肺癌；非小細胞肺癌；轉移灶；淋巴結
形態：上皮細胞
培養基和添加劑：RPMI-1640(GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, glucose 2.5g/L, Sodium Pyruvate 0.11g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度。
REFERENCE：Giaccone G , et al. Neuromedin B is present in lung cancer cell lines. Cancer Res. 52:2732s-2736s, 1992. PubMed: 1563005 NCI-Navy Medical Oncology Branch Cell Line Supplement. J. Cell. Biochem. suppl. 24:1996. Lin DL , Chang C . p53 is a mediator for radiation-repressed human TR2 orphan receptor expression in MCF-7 cells, a new pathway from tumor suppressor to member of the steroid receptor superfamily. J. Biol. Chem. 271: 14649-14652, 1996. PubMed: 8663350 Hay, R. J., Caputo, J. L., and Macy, M. L., Eds. (1992), ATCC Quality Control Methods for Cell Lines. 2nd edition, Published by ATCC. Caputo, J. L., Biosafety procedures in cell culture. J. Tissue Culture Methods 11:223-227, 1988. Fleming, D.O., Richardson, J. H., Tulis, J.J. and Vesley, D., (1995) Laboratory Safety: Principles and Practice. Second edition, ASM press, Washington, DC. Centers for Disease Control (1993), Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories Human Health Service Publication No. (CDC) 93-8395. U.S. Dept. of Health and Human Services; 3rd Edition U.S. Government Printing Office Washington D.C.
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