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目前使用的酶聯免疫檢測方法很多,其中人胎盤催乳素(HPL)ELISA試劑盒 按檢測目的可分為:
間接法——用于測定抗體
雙抗體夾心法——主要用于測定大分子抗原
競爭抑制法——主要用于測定小分子抗原
人胎盤催乳素(HPL)ELISA試劑盒 的分類:
1.雙抗體夾心法測抗原
雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法,操作步驟如下:
1)將特異性抗體與固相載體聯結,形成固相抗體。洗滌除去未結合的抗體及雜質。
2)加受檢標本,保溫反應。標本中的抗原與固相抗體結合,形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結合物質。
3)加酶標抗體,保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。*洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。
4)加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產物。通過比色,測知標本中抗原的量。
2.雙抗原夾心法測抗體
反應模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結合物,以檢測相應的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體。此法中受檢標本不需稀釋,可直接用于測定,因此其敏感度相對高于間接法。乙肝標志物中抗HBs的檢測常采用本法。本法關鍵在于酶標抗原的制備,應根據抗原結構的不同,尋找合適的標記方法。
3.間接法測抗體
間接法是檢測抗體常用的方法。其原理為利用酶標記的抗抗體(抗*抗體)以檢測與固相抗原結合的受檢抗體,故稱為間接法。
4.競爭法測抗原
小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的位點,因此不能用雙抗體夾心法進行測定,可以采用競爭法模式。其原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原競爭與固相抗體結合。標本中抗原量含量愈多,結合在固相上的酶標抗原愈少,zui后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。
5.ABS-ELISA法
ABS為親和素(avidin)*(biotin)系統(system)的略語。親和素是一種糖蛋白,分子量60000,每個分子由4個能和*結合的亞基組成。*為小分子化合物,分子量244。用化學方法制成的衍*-羥基琥珀酰亞胺酯可與蛋白質和糖等多種類型的大小分子形成*標記產物,標記方法頗為簡便。
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