背景介紹：Proteoglycans (PGs) are a family of proteins composed of different polypeptide chains containing glycosaminoglycan (GAG) modifications. They vary in their cellular locations and have diverse structure and functions. NG2 is a proteoglycan found in the nervous system, comprising a large integral membrane PG with a core protein of 300 kDa and at least one covalently attached chondroitin sulfate (CS) GAG chain. In the CNS this protein is expressed mainly on the surfaces of developing and adult oligodendrocyte precursor cells, but is also associated with developing chondrocytes, cardiomyocytes, pericytes and several human tumours. NG2 also stimulates alpha-4, beta-1 integrin-mediated adhesion and spreading by recruiting and activating a signaling cascade through CDC42, ACK1 and BCAR1. May activate FAK and ERK1/ERK2 signaling cascades. 

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中文名稱：黑色素瘤*蛋白多糖抗體

英文名稱：Anti-NG2 antibody

黑色素瘤*蛋白多糖抗體，Anti-NG2抗體-有關免疫組化實驗的重要問題

（一）組織材料處理

1.取材要取新鮮組織，大小合適，用生理鹽水洗凈

2.固定固定就是把病理標本組織浸泡在固定液中（常用的有4%多聚甲醛），使組織或細胞內蛋白質凝聚、沉淀或變性成為不溶性物質，并保持細胞原有的形態結構

3.洗滌固定后一定要把滲透到組織里面的固定液洗去，以利于進行脫水，若組織中留有較多的固定液，則將影響脫水劑，甚至可在組織中發生沉淀而影響后續染色及觀察，對于陳舊性標本或固定時間過長的標本，更應注意流水沖洗。

4.脫水脫水必須*，若脫水不盡，則切片后組織與空氣接觸即干燥收縮，蠟塊切面出現凹陷現象，雖可勉強切片，但染色效果差，染色時也容易脫落

5.透明乙醇等脫水劑不能溶解石蠟，所以浸蠟之前需要一個既能與乙醇混合又能溶解石蠟的媒劑，以便使石蠟浸入到組織中去，當組織中全部被透明劑占有時，光線可以透過，組織可呈現不同程度的透明狀態，此現象稱為透明。如果組織不能透明，表明脫水未盡必須重新返工，否則影響到浸蠟的進行，但返工時往往效果不好

6.浸蠟浸蠟時間根據組織的類型可適當調整，一般原則較小組織脫水時間和浸蠟時間較短；骨、肌肉等堅硬組織脫水和浸蠟時間不宜過長；脂肪組織、疏松結締組織脫水和浸蠟時間需增加

7.包埋包埋時應注意組織的包埋方向，否則將影響組織切片的形態。包埋用的石蠟要和浸蠟用的石蠟熔點*，包埋用的石蠟溫度要稍高于浸蠟的溫度。包埋好后可置于冷水中使石蠟迅速冷凝。包埋好的石蠟塊應呈均勻的半透明狀，如出現白色渾濁則其中存在石蠟的結晶，這種蠟塊不能切除薄的切片?？赡苁墙M織脫水不充分，組織內或石蠟中混有透明劑，或包埋時動作太慢或石蠟凝固太慢所致，所以冷卻時水溫不能過高，否則就不宜迅速凝固

8.切片可以將制作好的蠟塊置于低溫環境預冷，切出的切片連續性較好，有利于展片，一般切片厚度4-6um

規格：0.1ml/0.2m

濃度：1mg/1ml

抗體來源：本公司抗體有兔來源和鼠來源等

克隆類型：兔來源為多抗，鼠來源為單抗

產品類型：一抗

黑色素瘤*蛋白多糖抗體，Anti-NG2抗體簡單介紹：

別 名：MELCSPG; AN2; AN2 proteoglycan; Chondroitin sulfate proteoglycan 4 (melanoma-associated); Chondroitin sulfate proteoglycan 4; CSPG4; Cspg4 chondroitin sulfate proteoglycan 4; HMW-MAA; HSN tumor-specific antigen; MCSP; MCSPG; MEL-CSPG; Melanoma chondroitin sulfate proteoglycan; Melanoma-associated chondroitin sulfate proteoglycan; MSK16; CSPG4_HUMAN.

此產品本公司有標記的一抗出售，相關標記有：Alexa Fluor 350 標記、Alexa Fluor 488 標記、Alexa Fluor 555 標記、Alexa Fluor 647 標記、AP標記、APC標記、Biotin標記、Cy3標記、Cy5標記、Cy5.5標記、Cy7標記、FITC標記、Gold標記、HRP標記、PE標記、PE-Cy3標記、PE-CY5標記、PE-CY5.5標記、PE-CY7標記、RBITC標記

常用的抗原修復方法：

方法1：沸水浴修復，將盛有修復液和玻片的燒杯置于沸水浴環境，保持外部沸騰狀態15min，自然冷卻至室溫。

方法2：微波修復，將盛有修復液和玻片的燒杯置于微波爐中，高火5min，?；?min，中火5min，自然冷卻至室溫。

方法3：高壓修復，修復液加入高壓鍋加熱至沸騰，放入玻片，封蓋加壓持續加熱至噴氣時開始計時修復2min，自然冷卻至室溫。

方法4：使用*修復，將*修復液加入到組織上，37℃，消化30min

抗原修復，必須注意以下問題：

1、修復液的選擇。

0.01M枸櫞酸（pH6.0）：應用zui多的抗原修復液，適用于大多數的抗原，用該液修復后的抗原表達增強，抗原的定性和定位很理想，結果不錯;

0.05M EDTA（pH8.0）：應用較多的抗原修復液，修復能力較強，對于保存時間較長的切片或目的蛋白表達較弱的組織有很好的修復效果，需要控制好修復時間，否則容易出現較重的背景;

0.01M TBS（pH7.4）：中性修復液，適用于大多數抗原，對于核定位蛋白有較好的修復效果;

*：應用較多的抗原修復液，適用于大多數的抗原，使用溫度37℃，對于容易脫片的切片有很好的保護作用。

*：應用較多的抗原修復液，適用于大多數的抗原

2.抗原熱修復時應選擇溫度。

據實驗認為溫度在92℃－98℃是合適的，尤其在95℃為，這是因為：（1）這種溫度未達沸騰，切片不容易脫離載玻片；（2）能夠解離和破壞與蛋白交聯的甲醛醛鍵等，處理時可以隨意選擇和確定抗原修復的作用時間。如果選擇高壓修復，因為溫度較高，時間不宜過長

3.抗原修復時有效溫度所需持續時間根據各單位的設備條件以及使用的儀器不同，抗原修復時在有效的溫度范圍內所持續的時間也不一樣。

4.抗原修復液必須遵循自然降溫規律，否則效果不好或達不到抗原修復的目的。

5.盡量使用足量的抗原修復液，防止切片干涸。

6.切片必須附貼牢固，否則發生掉片。

黑色素瘤*蛋白多糖抗體保存條件：Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.

避免反復凍融，保質期一年。

免疫熒光雙重染色熒光雙染或多重染色是指將帶有不同熒光素標記的抗體孵育在同一張切片上，鏡下觀察時將不同的顏色組合在一起，將不同的抗原表達情況一起呈現出來，這樣分析多個抗原的關聯性更客觀、更直接。

熒光雙染也有直接法和間接法。直接法是使用帶有不同熒光素標記的兩個抗體同時孵育后觀測；間接法需要用到兩個不同種屬來源的一抗（例如一個鼠源抗體，一個兔源抗體），后面要選擇與一抗相對應的二抗同時需要帶有不同的熒光素標記（例如FITC標記山羊抗小鼠和Cy3標記山羊抗兔），間接法需要同時兼顧一抗和二抗的種屬關系，避免出現相互的交叉反應。

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