產品名稱：雞磷酸果糖激酶（PFK）ELISA檢測試劑盒

：135 64515386    

產品規格：48T/96T

檢測方法： ELISA酶聯免疫法

說 明 書：隨貨發送，也可直接在線銷售索取

測試種屬：人、大小鼠、豚鼠、兔子、牛、羊、豬、雞、鴨elisa試劑盒等種屬

檢測目的：用于測定血清，血漿及相關液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等標本。

試劑盒保存及有效期：2-8℃,避光保存:6個月。

產品產地：進口/國產

產品庫存：現貨

品牌：自主研發/進口原裝

產品價格：*，洽談！

試劑盒使用范圍：僅供科研檢測,不得用于臨床.

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 簡介酶聯免疫吸附測定（enzyme-linkedimmunosorbent assay簡稱ELISA)是在免疫酶技術的基礎上發展起來的一種新型的免疫測定技術。ELISA過程包括抗原（抗體）吸附在固相載體上稱為包被，加待測抗原（抗體），再加相應酶標記抗體（抗原），生成抗原（抗體）-待測抗體（抗原）-酶標記抗體的復合物，再與該酶的底物反應生成有色產物。借助分光光度計的光吸收計算抗體（抗原）的量。待測抗體（抗原）的定量與有色產生成正比。
 
二、ELISA試劑盒組成
1. 微孔板 (固相抗體)     96 well
2. 標記抗體 (30倍濃縮，HRP標記抗體)  0.4 ml
3. 標準品    0.5 ml × 2
4. EIA緩沖液 (1% BSA, 0.05% Tween-20 含有PBS)   30 ml
5. 標記抗體稀釋液 (1% BSA, 0.05% Tween-20 含有PBS) 12 ml
6. 顯色液 (TMB底物液) 15 ml
7. 終止液 (1N硫酸) 12 ml
8. 洗滌緩沖濃縮液 (40倍濃縮，0.05% Tween-20的磷酸緩沖液)    50 ml

三、ELISA法的應用
1.免疫酶染色各種細胞內成分的定位。
2.研究抗酶抗體的合成。
3.顯現微量的免疫沉淀反應。4.定量檢測體液中抗原或抗體成分。
 
四、ELISA實驗要點
洗滌：洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動洗滌儀外，手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種，過程如下：
（1）浸泡式 a.吸干或甩干孔內反應液；b.用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去）；c.浸泡，即將洗滌液注滿板孔，放置1-2分鐘，間歇搖動，浸泡時間不可隨意縮短；d.吸干孔內液體。吸干應*，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干；e.重復操作c和d，洗滌3-4次（或按說明規定）。在間接法中如本底較高，可增加洗滌次數或延長浸泡時間。微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質的結合是疏水性的，非離子型洗滌劑既含疏水基團，也含親水基團，其疏水基團與蛋白質的疏水基團借疏水鍵結合，從而削弱蛋白質與固相載體的結合，并借助于親水基團和水分子的結合作用，使蛋白質回復到水溶液狀態，從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20，其濃度可在0.05%-0.2%之間，高于0.2%時，可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度。
（2）流水沖洗式 流水沖洗法zui初用于小珠載體的洗滌，洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時附接一特殊裝置，使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗，持續沖洗2分鐘后，吸干液體，再用蒸餾水浸泡2分鐘，吸干即可。浸泡式猶如盆浴，流水沖洗式則好比淋浴，其洗滌效果更為*，且也簡便、快速。已有實驗表明，流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時設法加大水流量或加大水壓，讓水流沖擊板孔表面，洗滌效果更佳。
五、標本的收集和保存
1.要注意避免出現嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有類似過氧化物的活性，因此，在以HRP為標記酶的ELISA測定中，如血清標本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應顯色。
2.樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染，一則細菌的生長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產生分解作用；二則一些細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作標記的測定方法產生非特異性干擾。
血清標本如是以無菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長時間保存，應在-70℃以下。
3.冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產生破壞作用，從而引起假陰性結果。此外，凍融標本的混勻亦應注意，不要進行劇烈振蕩，反復顛倒混勻即可。
4.標本在保存中如出現細菌污染所致的混濁或絮狀物時，應離心沉淀后取上清檢測。

六、魚熱應激蛋白70 (HSP70) ELISA試劑盒公司現貨報價標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

七、ELISA操作中的洗滌
a)洗液不要溢出孔外，以免污染相鄰的孔，特別是每次洗板的前兩遍，若高濃度的孔污染了低濃度的孔或空白孔，其造成的交叉污染的孔是洗不掉的，背景肯定會增高。 
b)特別注意：設計實驗的時候要考慮實驗孔的位置，保證甩掉洗液時，空白孔、低濃度孔或陰性對照組在上面或一側或分開。同時注意甩掉洗液的動作翻轉（從正上方旋轉120－150度）要迅速、干脆。甩板不要手腕左右搖擺、旋轉來甩液體！甩出后以直線方式補2－3次甩出液體。 
c)用干凈的濾紙，不要用衛生紙，因為細小粉塵或者碎屑容易吸附到孔底，導致洗板不干凈，結果偏高或偏低，重復孔的數值也會相差很大。
d)每次拍板不要重復在一個地方拍，特別是洗去酶的步驟；拍板不宜過輕，否則拍不干凈，拍板很用力不會對蛋白有什么影響。但注意不要太重，以至把板條給拍斷。每次洗板后輕叩幾下，zui后一次一定要扣干凈。
e)不能減少洗液體積、洗板時間和次數。洗板時間太短，洗板效果不佳。延長洗板時間和增加洗板次數可以使背景更干凈。

八、樣本處理及要求
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。
2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
九、魚熱應激蛋白70 (HSP70) ELISA試劑盒公司現貨報價操作技術流程 
1、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復溫平衡30分鐘。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標準品和待測樣本：取足夠數量的酶標包被板，固定于框架上，分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加*40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對照孔不加。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。
6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL，空白對照孔不加。
7、溫育：重復4的操作。
8、洗板：重復5的操作。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，37℃避光顯色15min。
10、終止：取出酶標板，每孔加終止液50μL，終止反應（顏色由藍色立轉黃色）。
11、測定：以空白孔調零，在終止后15分鐘內，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。
12、計算：根據標準品的濃度及對應的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數。
 
十、魚熱應激蛋白70 (HSP70) ELISA試劑盒公司現貨報價計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

十一、ELISA試劑盒檢測范圍和保存條件及有效期             
1ng/L -30ng/L
1.試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
 
十二、ELISA試劑盒性能
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990以上。
2.批內與批見應分別小于9%和11% 
十三、ELISA試劑盒常見問題
問：比如說我偶然發現只加*的也出現淺黃色，這怎么解釋呢？
答：可能的原因：
1、洗板時有交叉感染   
2、*中本身有本底的一個較小的讀數。也是ELISA的一個局限性，免疫的很多反應稀釋液 洗滌液發揮了很重要的作用，不加的話效果不明顯，但是加了以后有些成分可能有一部分的干擾作用。 可以比較不同的廠家的盒子 都存在這些局限性的，但不影響zui終的結果。ELISA嚴格的說就是一個半定量的方法。
問：特殊稀釋液是做什么的？
答：一般情況都不要用的，他的zui大的用途就是稀釋標準品。但是,現在標準品已經稀釋好了 所以不需要用了。如果你需要更多的標準品，可以用他來稀釋。
問：ELISA試驗的標準曲線和測定的重復性差，這是什么原因造成的？
答：ELISA試驗的標準曲線和測定的重復性差，這是典型的由測定操作引起的問題，常見原因如下： 
a)可能原因：ELISA加樣本及試劑量不準；孔間不*；
解決方法：校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時要緊密。
重復某一樣品時，加樣時間盡可能與*次接近；
重復測定標本，操作條件、人員等應盡可能與上次保持*，以排除這些因素造成的不*的可能性；
樣品稀釋前應充分混勻。
b)可能原因：加樣過快，孔間發生污染；
解決方法：重復測定標本，操作條件、人員等應盡可能與上次保持*，以排除這些因素造成的不*的可能性；加樣不要過快。