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    Mouse Granzyme B ELISA Kit

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    產品型號

    品       牌

    廠商性質生產商

    所  在  地上海市

    聯系方式:周經理查看聯系方式

    更新時間:2018-05-17 11:26:15瀏覽次數:260次

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    產品簡介

    Mouse Granzyme B ELISA Kit
    規格: 96T
    檢測范圍:15.6pg/ml→1000pg/ml。
    特異性: 系統和其它細胞因子無交叉反應。
    敏感性: <3pg/ml
    保存: 2-8℃(頻繁使用時);-20℃(長時間不用時)。
    有效期: 6 個月(4℃);12 個月(-20℃)。
    用途: 用于體外定量分析小鼠血清、血漿、細胞裂解液、細胞培養上清。

    詳細介紹

    Mouse Granzyme B ELISA Kit
    規格: 96T
    檢測范圍:15.6pg/ml→1000pg/ml。
    特異性: 系統和其它細胞因子無交叉反應。
    敏感性: <3pg/ml
    保存: 2-8℃(頻繁使用時);-20℃(長時間不用時)。
    有效期: 6 個月(4℃);12 個月(-20℃)。
    用途: 用于體外定量分析小鼠血清、血漿、細胞裂解液、細胞培養上清。
    Mouse Granzyme B ELISA Kit工作原理
    Granzyme B,顆粒酶 B,是一種分子量為 29kDa 的中性絲氨酸蛋白酶,存在于特異性的細胞毒性
    T 細胞和自然殺傷細胞中。主要用于檢測腫瘤組織中細胞毒性 T 細胞。可用于自然殺傷細胞、T
    細胞淋巴瘤以及退行性大細胞淋巴瘤的檢測和診斷。
    所提供的小鼠 Granzyme B ELISA Kit 是典型的夾心法酶聯免疫吸附測定試劑盒(EnzymeLinked-Immuno-Sorbent Assay, ELISA)。預先包被的抗體為單克隆抗體。檢測相抗體為多克隆抗體,經生物素(biotin)標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應后,PBS 或 TBS 洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應;經過 PBS 或 TBS 的*洗滌后用底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 Granzyme B 呈正相關。

    內容

    規格

    數量

    預包被抗Granzyme B 抗體的 96 孔板

    96T

    1

    凍干標準品

    10ng/管

    2

    生物素標記

    130ul

    1

    親和素-過氧化物酶復合物

    130ul

    1

    樣品稀釋液

    30ml

    1

    抗體稀釋液

    12ml

    1

    ABC 稀釋液

    12ml

    1

    TMB 顯色液

    10ml

    1

    TMB 終止液

    10ml

    1

    洗滌緩沖液(25X)

    20ml

    1

    封板膜

     

    2

    說明書

     

    1

    需要而未提供的試劑和器材

    1. 標準規格酶標儀。

    2. 自動洗板機。

    3. 恒溫箱

    4. 系列可調節移液器及吸頭,一次檢測樣品較多時,用多通道移液器。

    5. 干凈的試管和 Eppendof 管。

    6. 用去離子水將 25X 洗滌緩沖液稀釋 25 倍,成 1X 洗滌緩沖液。

    注意事項

    1. 使用前 TMB 顯色液應為無色透明溶液,若發現顏色異常,請及時與廠家。

    2. 用戶在初次使用試劑盒時,應將各種試劑管離心數分鐘,以便試劑集中到管底。

    3 要嚴格避免操作過程中酶標板干燥。干燥會使酶標板上生物成份迅速失活。

    4. 為免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和試管。

    5. 禁止混用不同批次試劑盒內的試劑。

    6. 本公司提供的 96 孔酶標板是單條可拆型酶標板,用戶可按需求使用;剩余的酶標板請

     按保存條件貯存。

    7. 揭封板膜和覆蓋封板膜時應避免用力過大導致液體濺出。

    洗板方法

    手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將 1X 洗滌緩沖液至少 300ul 注入孔內,浸泡 1-2 分鐘。根據需要,重復此過程數次。

    自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

    樣品的準備和保存

    樣品如果不立即分析,應分裝后冷凍保存,且避免反復凍融。

    細胞培養上清——離心去除沉淀,立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

    血清——用干凈試管收集血液,室溫凝固 30 分鐘,離心 1500×g 15 分鐘,收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

    血漿—在冰塊上收集肝素或 EDTA 抗凝血,抽血后 30 分鐘內離心 1500×g 15 分鐘。血漿在 2-8℃進一步離心 10000×g 10 分鐘,以*清除血小板。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

    細胞裂解液——對于貼壁細胞,去除培養液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。加入適量裂解液,用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常 10 秒后,細胞就會被裂解。對于懸浮細胞,離心收集細胞,用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。加入適量裂解液,用槍吹打把細胞吹散,用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后,10000—14000g 離心 3-5 分鐘,取上清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

    樣品稀釋的一般原則

    用戶須估計樣品待測因子的含量,決定適當的稀釋倍數,以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA 試劑盒的*檢測范圍。根據待測因子含量高、中、低的不同,分別采取不同的

    稀釋方案:

    高——指待測因子在 20-200ng/ml。一般按 1:100 稀釋。297ul 樣品稀釋液加 3ul 樣品。

    中——指待測因子在 2-20ng/ml。一般按 1:10 稀釋。225ul 樣品稀釋液加 25ul 樣品。

    低——指待測因子在 31.2-2000pg/ml。按 1:2 稀釋。100ul 樣品稀釋液加 100ul 樣品。

    特低——指待測因子≤31.2pg/ml。樣品一般不做稀釋,或按 1:2 稀釋。

    操作程序總結:

    1. 加樣品和標準品,37℃反應 90 分鐘。不洗。

    2. 加生物素標記抗體,37℃反應 60 分鐘。1X 洗滌緩沖液洗滌 3 次。

    3. 加 ABC,37℃反應 30 分鐘。1X 洗滌緩沖液洗滌 5 次。

    4. TMB37℃反應 15-20 分鐘。

    5. 加入 TMB 終止液,讀數。

    雞 溶菌酶 LZM Lysozyme

    雞 肉毒堿 Carnitine Carnitine

    雞 三碘甲狀腺原氨酸 T3 Tri-iodothyronine

    雞 神經疾病靶標酯酶 NTE Neuropathy Target Esterase

    雞 神經絲蛋白 NF Neurofilament

    雞 神經元烯醇化酶 NSE Neuron-specific enolase

    雞 腎上腺素 EPI Epinephrine;Adrenaline

    雞 生長激素 GH growth hormone

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