多克隆抗體
抗原通常是由多個抗原決定簇組成的,由一種抗原決定簇刺激機體,由一個B淋巴細胞接受該抗原刺激所產生的抗體稱之為單克隆抗體(Monclone antibody)。由多種抗原決定簇刺激機體,相應地就產生各種各樣的單克隆抗體,這些單克隆抗體混雜在一起就是多克隆抗體,機體內所產生的抗體就是;除了抗原決定簇的多樣性以外,同樣一種抗原決定簇,也可刺激機體產生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五類抗體。抗原刺激機體,產生免疫學反應,由機體的漿細胞合成并分泌的與抗原有特異性結合能力的一組球蛋白,這就是免疫球蛋白,這種與抗原有特異性結合能力的免疫球蛋白就是抗體。
1. 一站式,用戶只需要準備PCR產物即可進行AT克隆。AT克隆就是利用T載體兩個3'端各帶有一個T突出,而PCR擴增產物兩個3'端各帶有一個A突出的特點,在DNA連接酶的作用下,將PCR產物克隆到T載體中的過程,它是克隆PCR擴增產物的主要手段。本產品提供了完成AT克隆的所有成份,具有下列特點:
2. T載體由XcmI酶切方一站式TA克隆試劑盒法制備,兩個5'端100%含T突出,自連率幾乎為零。
3. 克隆效率高,一次AT克隆實驗一般能得到上百個重組子。
4. 陽性率高,一般能到90%以上,大大縮短了篩選工作。
5. 提供供兩次實驗用的對照插入片段,方便分析實驗數據。
6. 插入位點兩側有對稱的常見酶切位點(如BstZI、EcoRI、NotI),便于對克隆的PCR片段進行近一步的分析。
7. 克隆位點兩側分別有T7和SP6 RNA聚合酶啟動子,便于用克隆的PCR片段制備RNA探針。
8. 可以使用pUC/M13 Forward和Reverse測序引物測定插入片段的序列。
9. T克隆位點位于β-半乳糖苷酶的α-肽編碼區內,可以進行藍白斑篩選。
10. 含有絲狀噬菌體f1 復制起始子,可以制備單鏈DNA。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質分離,并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相,離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離,當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時,變性的質粒DNA又恢復原來的構型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構,通過離心,染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。