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廣州潔特生物過濾股份有限公司
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通過基因重組技術，將蛋白A與蛋白G基因重組于同一質粒載體中，并在大腸桿菌中進行表達，得到分子量為50.5KDa的可溶性蛋白A/G。該可溶性蛋白A/G具有四個IgG結合位點，來自于蛋白A；和兩個IgG的結合位點，來自于蛋白G。因具有上述特性，使得基因工程重組蛋白A/G具有廣泛的IgG的結合能力，對各種哺乳類動物的IgG都能結合，使得該產品在IgG的診斷和純化中具有十分廣泛的用途。本產品采用“高配基、......
l 產品技術指標
rec-Protein A/G per Sepharose 4FF 比值：4.0-4.5mg rec-Protein A/G per ml Sepharose 4FF
rec-Protein AG分子量：50.5 KDa
每分子rec-Protein G可結合IgG位點數：6個（4個來自于蛋白A，2個來自于蛋白G）
rec-Protein A可結合白蛋白位點數：無
線性流速：300-500 cm/h
耐壓指數：≤0.3 MPa（填料）
l 注意事項
請在實驗前仔細閱讀本rProtein A預裝柱使用說明。同時，將所要的所有試劑、耗材拿出置于室溫，恢復至室溫使用。
l 產品保存
產品儲存于2-8℃，保質期兩年。
l rProtein A/G-Sepharose 4FF純化IgG抗體步驟
以下方法適用于從血清或腹水中純化IgG抗體，不同來源的IgG與rProteinA/ G的結合能力不同，具體情況請參考表1。
1. 將血清或腹水樣品（推薦上樣量2 mL樣品/mL柱）裝入截留分子量3.5 KDa透析帶中，于4 ℃冰箱中對1× PBS（pH 7.4）透析過夜；
2. 將rProtein A/G-Sepharose 4FF裝柱固定好，用10倍柱體積1× PBS（pH 7.4）平衡層析柱，建議流速為1 mL/min；
3. 將透析好的樣品從層析柱上端加入，建議流速為1 mL/min，為了獲得更好的抗體結合效果可將流穿液再上樣，重復2遍（或者是將樣品1次性加入層析柱后置于搖床上，輕輕搖動，結合30 min）；
4. 樣品結合后，用20倍柱體積1× PBS(pH 7.4)洗滌層析柱，建議流速為1 mL/min，勿讓層析柱滴干；
5. 洗脫IgG，向層析柱上端加入洗脫液（100 mM，pH 2.7），用預先加有100 μL中和緩沖液（1M Tris，pH 9.0）的4 mL Ep管接收，2 mL /管，共收集10倍柱體積，進行10 % SDS-PAGE電泳，確定IgG樣品所在管，回收樣品。
6. 加入5倍柱體積再生緩沖液（100 mM，pH 2.0），再加入10倍柱體積ddH2O清洗層析柱。 向層析柱加入10倍柱體積, 20% Ethanol，于4~8 ℃冰箱。
表1 rProtein A/G 與Ig結合能力情況
IgG類型 | Protein A | Protein G | IgG類型 | Protein A | Protein G |
人 IgG1 | ++++ | ++++ | 大鼠 IgG2b | - | ++ |
人 IgG2 | ++++ | ++++ | 大鼠 IgG2c | + | ++ |
人IgG3 | - | ++++ | 大鼠 IgM | +/- | - |
人IgG4 | ++++ | ++++ | 兔 Ig | ++++ | +++ |
人IgA | ++ | - | 雞 Ig | - | + |
人n IgD | ++ | - | 倉鼠 Ig | + | ++ |
人IgE | ++ | - | 豚鼠 Ig | ++++ | ++ |
人 IgM | ++ | - | 牛 Ig | ++ | ++++ |
小鼠 IgG1 | + | ++++ | 馬 | ++ | ++++ |
小鼠 IgG2a | ++++ | ++++ | 奶牛 | ++ | ++++ |
小鼠 IgG2b | +++ | +++ | 豬 | +++ | +++ |
小鼠 IgG3 | ++ | +++ | 綿羊 | +/- | ++ |
小鼠 IgM | +/- | - | 山羊 | - | ++ |
大鼠 IgG1 | - | + | |||
大鼠 IgG2a | - | ++++ |
表2 rProtein A/G預裝柱系列產品參數
特性 | rProtein A/G | 特性 | rProtein A |
柱體積規格 | 1mL，5mL | 填料穩定性 | ＞20純化周期 |
基質組成 | 4%高交聯度瓊脂糖 | pH穩定性 | pH 2~11 |
基質平均粒徑 | 90μm | 推薦工作pH范圍 | pH 3~10 |
功能基團 | rProtein A/G：50.5kDa； IgG結合位點：6個 | 推薦在位清洗pH范圍 | pH 2~11 |
配基密度 | ≈3mg rProtein A/mL 基質 | 工作溫度 | 4~40℃ |
結合能力 | 35-50mg人IgG/mL填料 | 運輸條件 | 20%乙醇浸泡，室溫運輸 |
推薦流速 | 30~150cm/mL | 貯藏條件 | 20%乙醇條件下， 4~8℃保存 |
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