蛋白質N-端測定技術服務
蛋白質N-端測定技術服務服務簡介
幾乎所有的蛋白合成都起始于N-端,蛋白質N-端的序列組成對于蛋白質整體的生物學功能有著巨大的影響力。例如N-端序列影響蛋白質的半衰期,同時關聯著蛋白亞細胞器定位等,這些與蛋白的功能和穩定息息相關,重組蛋白表達純化產物的分析過程,特別是重組蛋白品的研發和工藝建立過程,需要對蛋白進行N-端測序分析,有利于幫助分析蛋白質的高級結構,揭示蛋白質的生物學功能。
目前對蛋白N端測序主要分類兩大類,其一為非質譜技術,例如經典的Edman降解法、利用反轉錄RT-PCR得到對應蛋白的cDNA,再來反推得到蛋白序列;其二為質譜技術。各自都有其使用的長處和制約之處,目前,市面上采用的,依然是基于經典的Edman降解法原理,利用美國ABI公司Procise491蛋白序列測序系統進行蛋白N-端測序。
蛋白質和多肽N-端測序技術是以Edman化學降解法為基礎的,Edman化學降解,其基本原理是包括通過異硫氰酸苯脂與蛋白質和多肽的N-端殘基的偶聯,苯氨基硫甲酰酞(PTC-肽)環化裂解,和噻唑呤酮苯氨(ATZ)轉化為苯異硫尿氨基酸(PTH-氨基酸)三個主要的化學步驟,每個循環從蛋白質與多肽裂解一個氨基酸殘基,同時暴露出新的游離的氨基酸進行下一個Edman降解,通過轉移的PTH-氨基酸鑒定實現蛋白質序列的測定。
樣品要求
1 蛋白凍干粉,蛋白溶液,固定在PVDF膜上的蛋白(NC膜不可以)。轉膜的蛋白質,需去離子水充分洗滌干凈,同時保證每條膜上蛋白量大于1ug。
2、蛋白濃度>1mg/ml, 小量不得低于10Pmol,蛋白純度>90%,測序樣品不返還。
3、蛋白溶液不含鹽,緩沖液,變性劑(SDS)等雜質;標明樣品緩沖液的成分。
4、天然純化多肽樣品:HPLC純度>95%,提供約100ug
5、如果已知蛋白表觀分子量或理論的蛋白質序列,請說明。
服務優勢
一站式服務:樣品處理-上機分析-數據分析-項目報告
檢測能力: N 端連續 60 個以上的氨基酸
快速檢測:合格樣品,1 個工作日可以出結果
專業的技術服務團隊