D-熒光素 游離酸 CAS 2591-17-5。螢火蟲熒光素酶/熒光素生物發光系統存在于螢火蟲（Photinus pyralis）和其他幾種甲蟲中。熒光素酶通過二氧雜環丁酮中間體氧化ATP進行活化熒光素。螢火蟲熒光素酶通過熒光素的ATP依賴性氧化產生光。來自該反應的560nm化學發光在數秒內達到峰值，當熒光素和ATP過量存在時，光輸出與熒光素酶活性成比例。螢火蟲熒光素酶長期以來與抗體結合，并在熒光素作為檢測底物的免疫測定中用作標記物。與HRP和堿性磷酸酶相比，熒光素酶對化學修飾的耐受性較差。該酶的一個特別優點是除了其高靈敏度之外，在哺乳動物組織中存在低內源熒光素酶活性。熒光素酶的另一個重要用途是衛生監測領域，熒光素酶/熒光素系統可用于檢測污染，因為存在于所有生物體中的ATP需要發光，這種ATP生物發光的主要應用是通過測試食品加工廠中的表面來確定質量，以確定是否存在設備或產品的污染。D-熒光素 游離酸 CAS 2591-17-5是美國AAT Bioquest 的產品。

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操作方法

以下方案是鉀鹽和鈉鹽制備的一個例子，它可以適用于大多數細胞類型和體內動物用途。

1.用于體外生物發光圖像測定的實施方案

1.1在無菌水中制備100mM（100-200X）熒光素原液，混合均勻。隨配隨用，或使用等分試樣，其他等分儲存在-20°C，避免凍融循環，避免暴露在光線下。

1.2在預熱的組織培養基中制備0.5-1mM D-熒光素的工作溶液。

1.3從培養的細胞中分離培養基。

1.4將熒光素工作溶液加入細胞中，并在成像前將細胞在37°C孵育5-10分鐘。

2.用于體內生物發光圖像測定的實施方案

2.1在DPBS中制備15mg / mL熒光素儲備溶液，不含Mg²⁺和Ca²⁺。 混合均勻。

2.2通過0.2μm過濾器過濾滅菌溶液。隨配隨用或單獨使用等分試樣，其余等分儲存在-20°C，避免凍融循環，避免暴露在光線下。

2.3在動物體重150mg / kg（或10μL/ g熒光素儲備溶液）成像10-15分鐘在腹膜內（i.p.）注射熒光素。

注意：應對每種動物模型進行熒光素的動力學研究，以確定峰值信號時間。

3.熒光素報告分析分子測定的實施方案

3.1在無菌水中制備100mM熒光素儲備溶液。 隨配隨用或單獨使用等分試樣，其余等分儲存在-20°C，避免凍融循環，避免暴露在光線下。

3.2制備1mM D-熒光素的工作溶液，其中含有3mM ATP，1mM DTT和15mM MgSO₄的25mM tricine緩沖液，pH7.8。

3.3將5-10μl細胞裂解液移入微孔板中。使用不含裂解液的裂解試劑或緩沖液作為空白對照。

3.4根據制造商的說明，使用熒光素工作溶液的普利光度計。

3.5注入200μl熒光素工作溶液。