Cell Meter細胞內熒光法過氧化氫檢測試劑盒 返回列表頁

樣品實驗方案

簡要概述

1.在生長培養基中制備細胞
2.用OxiVision 藍色過氧化物傳感器染色細胞
3.用測試化合物處理細胞
4.用DAPI濾光片或Ex / Em = 405 / 450nm監測熒光強度

溶液制備

1.儲備溶液

所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。 避免反復凍融循環。
1. OxiVision 藍色過氧化物原液（500X）：
將40μLDMSO（組分C）加入到OxiVision 藍色過氧化物（組分A）的小瓶中并充分混合以制備500X OxiVision 藍色過氧化物傳感器儲備溶液。 注意：20μL重組的OxiVision 藍色過氧化物傳感器儲備溶液足以用于1個平板。 應立即使用原液。 避光。

2.工作溶液

將10μL500XOxiVision 藍色過氧化物儲備溶液加入500μL分析緩沖液（組分B）中，充分混合，制成OxiVision 藍色過氧化物工作溶液。 注意：此OxiVision 藍色過氧化物工作溶液不穩定; 使用前根據需要準備。

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樣品分析

1.添加10μL/孔（96孔板）或2.5μL/孔（384孔板）的OxiVision 藍色過氧化物工作溶液，每孔90μL細胞培養物，96孔板或22.5μL細胞培養物在384孔細胞板中。注意：染色前無需清洗細胞。建議在培養基中染色細胞。

2.用測試化合物在培養基或37℃的所需緩沖液中處理細胞一段所需的時間。對于對照樣品（未處理的細胞），加入相應量的化合物緩沖液。注意：建議在培養基中處理細胞。然而，如果測試的化合物對血清敏感，則可以在前吸出生長培養基和血清因子。抽吸后，將1X Hank鹽溶液和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或您選擇的緩沖液加入細胞中。或者，可以在無血清培養基中處理細胞。我們用培養基中的100μM過氧化氫在37℃處理Jurkat細胞90分鐘以誘導過氧化氫。詳細信息請參見圖1。

3.用DPBS洗滌細胞1-2次，并用100uL /孔（對于96孔板）或25uL /孔（對于384孔板）替換測定緩沖液（組分C）。

4.使用帶DAPI過濾器的熒光顯微鏡拍攝圖像。