Cell Meter細胞內熒光法過氧化氫檢測試劑盒 返回列表頁

Cell Meter細胞內熒光法過氧化氫檢測試劑盒  是美國AAT Bioquest生產的用于檢測過氧化物的試劑盒，過氧化氫 (H2O2) 是一種活性氧代謝副產物，是許多氧化應激相關狀態的關鍵調節劑。它參與了許多與哮喘、動脈粥樣硬化、糖尿病血管病變、骨質疏松癥、許多神經退行性疾病和唐氏綜合癥有關的生物事件。也許過氧化氫生物學趣的方面是最近的報告，即抗體具有將分子氧轉化為過氧化氫的能力，有助于免疫系統的正常識別和破壞過程。這種活性物質的測量將有助于確定氧化應激如何調節不同的細胞內途徑。該 Cell Meter 過氧化氫檢測試劑盒使用我們*的 OxiVision Green 過氧化氫探針來量化活細胞中的過氧化氫。 OxiVision Green 具有細胞滲透性，當它與過氧化氫反應時會產生綠色熒光。該試劑盒是一種優化的“混合和讀取"分析格式，與 HTS 液體處理儀器兼容。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供的Cell Meter細胞內熒光法過氧化氫檢測試劑盒 。

實驗方案

96孔板的測定方案

概述

用于溶液測定

1.準備H2O2反應混合物（50μL）

2.加入H2O2標準品或測試樣品（50μL）

3.在室溫下孵育10-60分鐘

4.在Ex / Em = 490/525 nm （cutoff=515nm）處檢測熒光強度

注意：在開始實驗之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分。

用于活細胞檢測

1. 在生長培養基中制備細胞
2. 使用 OxiVision Green 過氧化氫探針工作溶液對細胞進行染色并孵育
3. 用測試化合物處理細胞
4. 在 Ex/Em = 490/525 nm (Cutoff = 515nm) 處用底部讀取模式檢測熒光強度

溶液配制

1. OxiVision Green 過氧化氫探針儲備液 (250X)
將 50 μL DMSO（組分 D）加入 OxiVision Green 過氧化氫探針（組分 A）的小瓶中，制成 250X OxiVision Green 過氧化氫探針儲備液，注意避光。

2. H2O2 標準溶液（20 mM）
將 22.7 μL 的 3% H2O2（0.88 M，組分 B）加入 977 μL 的 Assay Buffer（組分 C）中，制成 20 mM H2O2 標準溶液。

注意 稀釋的 H2O2 標準溶液不穩定。 未使用的部分應丟棄。

3.H2O2 標準
將 50 μL 20 mM H2O2 標準溶液加入 950 μL Assay Buffer（組分 C）中，得到 1000 μM H2O2 標準溶液。 取 1000 μM H2O2 標準溶液并進行 1:3 的系列稀釋，以得到含有測定緩沖液（組分 C）的系列稀釋的 H2O2 標準品（HS1 - HS7）。

4.工作溶液配制

將 20 μL 250X OxiVision Green 過氧化氫探針儲備液加入 5 mL 檢測緩沖液（組分 C）中，制成 OxiVision Green 過氧化氫探針工作溶液。