Amplite 比色法草酰乙酸檢測試劑盒 返回列表頁

Amplite 比色法草酰乙酸檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產的用于檢測草酰乙酸的試劑盒，草酰乙酸是檸檬酸循環的重要組成部分，它與乙酰*酶A反應生成檸檬酸鹽。它還涉及糖異生，尿素循環，乙醛酸循環，氨基酸合成和脂肪酸合成。草酰乙酸的缺乏限制了糖原異生和尿素循環功能，并且可以導致能量產生減少。草酰乙酸也可用作血液谷*酸劑，在創傷性腦損傷后提供神經保護，表現為海馬神經元損失減少和神經功能。Amplite 比色草酰乙酸檢測試劑盒提供了一種靈敏的檢測方法，用于定量生物樣品中的草酰乙酸。草酰乙酸轉化為丙酮酸，通過酶偶聯反應產生過氧化氫。用吸光度酶標儀在575nm處用Amplite Red監測過氧化氫的產生。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優質的Amplite 比色法草酰乙酸檢測試劑盒。

96孔板測定示例

概述

準備測試樣品（50μL）和連續稀釋的草酰乙酸標準品（50μL）

加入等體積的測定混合物（50μL）

在室溫下孵育30分鐘至1小時

監測575nm處的吸光度強度

注意：在開始實驗之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分。

操作方法

1.準備連續稀釋的草酰乙酸標準品和測試樣品：

1.1將100μLDdH2O加入到草酰乙酸鹽標準小瓶（組分E）中以制備100mM草酰乙酸標準溶液。

1.2制備草酰乙酸標準稀釋液：將10μL100mM草酰乙酸鹽（來自步驟1.1）加入990μL測定緩沖液（組分C）中，得到1mM草酰乙酸溶液。 將320μL的1mM草酰乙酸標準溶液加入680μL測定緩沖液中以制備320μM草酰乙酸溶液。 進行1：2連續稀釋，得到160,80,40,20,10,5μM連續稀釋的草酰乙酸標準品。

1.3根據說明書中的表1，將50μL含草酰乙酸的樣品和連續稀釋的草酰乙酸標準品加入透明底96孔微量培養板中。

2.準備草酰乙酸測定混合物：

2.1Make Amplite 紅色底物原液（200X）：將50μLDMSO（組分F）加入Amplite Red底物（組分A）中，制成200X Amplite Red底物原液。

2.2制備草酰乙酸脫羧酶（OAC）儲備溶液（100X）：將50μLddH2O加入草酰乙酸脫羧酶（組分D）中以制備100×草酰乙酸脫羧酶原液。

2.3制備測定混合物：將5mL測定緩沖液（組分C）加入一個酶混合瓶（組分B）中充分混合。 將50μLOAC儲備溶液（來自步驟2.2）和25μL200XAmplite Red儲備溶液（來自步驟2.1）轉移到瓶中并充分混合。

注意1：分析混合物不穩定，及時使用，避免直接暴露在光線下。

注意2：將未使用的200X Amplite Red原液儲存在-20℃，避免光照和反復凍融循環。

3.運行草酰乙酸測定：

3.1將50μL測定混合物（來自步驟2.3）添加到草酰乙酸標準品，空白對照和測試樣品的每個孔中（參見步驟1.3），以使總草酰乙酸測定體積為100μL/孔。

注意1：對于384孔板，每孔加入25μL樣品，25μLAssay混合液。

注意2：在pH 6.5至7.0下進行草酰乙酸測定。

3.2在室溫下孵育反應混合物30分鐘至1小時。

3.3使用575 nm的吸光度讀板儀檢測吸光度的增加。