熒光法焦磷酸檢測試劑盒 返回列表頁

操作步驟

簡要概述

準備PPi探針工作溶液（50μL）
添加焦磷酸鹽標準品和/或測試樣品（50μL）
在室溫下孵育10至30分鐘
檢測Ex / Em = 370/470 nm處的熒光強度（cutoff= 455 nm）

溶液制備

1.制備儲備溶液

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。 避免反復凍融循環。
1.1 PPi探針儲備溶液（200X）：
將50μLDMSO（組分D）加入到PPi探針（組分B）的小瓶中以制備200X PPi探針儲備溶液。 注意：對于一個96孔板，25μLPPiSensor儲備溶液就足夠了。

2.制備標準溶液

焦磷酸鹽標準
通過將10μL50mM焦磷酸鹽標準品（組分C）加入490μL測定緩沖液（組分A）或您選擇的緩沖液（優選50 mM Hepes緩沖液，pH 7）中制備1 mM焦磷酸鹽標準品，制成1 mM焦磷酸鹽標準品。 取1 mM焦磷酸鹽標準品（PS7）進行1：3連續稀釋，得到連續稀釋的焦磷酸鹽標準品（PS6-PS1）和測定緩沖液（組分A）。

3.制備工作溶液

將25μL200XPPi Sensor儲備溶液加入5 mL分析緩沖液（組分A）中，并充分混合。 注意：由于該檢測方法對PPi具有高靈敏度，因此使用不含PPi的實驗室器具和試劑非常重要。 注意：DTT（1 uM）會增加背景，MgCl2≥2mM會降低反應。