加入含有總大腸菌群細菌的水樣,目標細菌在Minimal Medium ONPG-MUG培養基中36℃±1℃培養,總大腸菌群細菌產生的特異性生物酶β一半乳糖苷酶能分解Minimal Medium ONPG-MUG培養基中的色源底物ONPG,使培養呈現黃色;同時水樣中大腸埃希氏菌產生特異性的β一葡萄糖醛酸酶分解Minimal Medium ONPG-MUG培養基中的熒光底物MUG,產生特征性熒光。同樣原理,耐熱大腸菌群(糞大腸菌群)在44.5℃培養時會分解Minimal Medium ONPG-MUG培養基中的色源底物ONPG,使培養基呈現黃色。