英文名稱:TDT;Terminal Transferase;Terminal Deoxynucleotidyl Transferase
其他名稱:末端脫氧核苷酸轉移酶
CAS號:9027-67-2
分子量:60000
級別:BR
來源:大腸桿菌細胞,含有編碼牛胸腺末端脫氧核苷轉移酶的基因
濃度:20u/ul
活性定義:是指在37℃、60分鐘內將1nmol脫氧核糖核酸摻入多聚核苷酸片段(吸附在DE-81上)所需的酶量
酶活性分析混合物:66mM二甲胂酸鉀(PH7.2),1mM CoCL2, 0.01%(v/v) Triton X-100, 10uM oligo(dT)10, 1mM dTTP和0.4MBq/ml[3h]-dTTP
保存液組分:100mM *(PH6.8)、2mM β-巰基乙醇,0.01%(v/v) Triton X-100和50%(v/v)甘油
5×反應緩沖液:1M 二甲胂酸鉀、125mM Tris,0.05%(v/v) Triton X-100,5mM CoCL2(PH7.2,25℃)
抑制劑:金屬螯合劑、銨、氯化物、碘化物和磷酸鹽離子
失活:加入EDTA,70℃加熱10分鐘
質量保證:測試表明無內切和外切脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染
注意:由于含有CoCL2,TdT反應緩沖液不能與下游應用兼容,需采用柱離心法或*/氯仿抽提及乙醇沉淀方法純化反應混合物,除去CoCL2
性狀:懸浮液,重組酶。末端轉移酶(Terminal transferase, TdT)是一種無需模板的DNA聚合酶,催化脫氧核苷酸結合到DNA分子的3'羥基端。帶有突出、凹陷或平滑末端的單雙鏈DNA分子均可作為TdT的底物。一般操作是:先在載體上打開一單個位點,把它與末端轉移酶和某一dNTP(如dATP)一起保溫以使添尾,另一待插入的外源DNA段則用互補的用同法添dNTP(dTTP)用同法添尾。接著使上述兩種都接上互補單鏈尾的DNA段彼此退火,使形成一雜合載體來轉化受體菌。雜合載體中的裂隙或切口可被受全菌所修復。
用途:生化研究。催化DNA的3'末端添加同聚物;DNA的3'末端標記
保存:-20°C
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