小鼠小膠質瘤細胞 返回列表頁

小鼠小膠質瘤細胞具體操作
取出凍存管： 根據細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。
從液氮罐中取出細胞盒，取出所需的細胞，同時核對管外的編號。
初學者易犯錯誤：水浴鍋未預熱或者未預熱到37℃。
水浴鍋內凍存管太多，導致傳熱不佳，使融化時間延長。
離心前忘記平衡，導致離心機損壞和細胞丟失。
一次復蘇細胞過多，忘記更換吸頭和吸管，導致細胞交叉污染。
實驗前準備：將水浴鍋預熱至37℃
小鼠小膠質瘤細胞用75％酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。
在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養瓶 等。
迅速解凍：

迅速將凍存管投入到已經預熱的水浴鍋中迅速解凍，并要不斷的搖動，使管中的液體迅速融化。
.約-2min后

凍存管內液體*溶解，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁，再拿入超凈臺內。
平衡離心：用架盤天平平衡后，放入離心機中3000r/min 離心3min
制備細胞懸液：吸棄上清液。
向離心管內加入0ml培養液，吹打制成細胞懸液。
活化與細胞復蘇    收到細胞株包裹時， 請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形， 若有請立即通知。細胞株請盡速開始培養， 或立即冷凍保存（置于–70 °C， 隔夜后， 移到liq N2）。
 細胞復蘇的原則－快速融化：必須將凍存在-96℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶，對細胞造成損害。
細胞計數：細胞濃度以5×05/ml為宜。
培養細胞將復合細胞計數要求的細胞懸液分裝入培養瓶內，將培養瓶放入37℃和5％CO2的培養箱內2-4小時（或者24-48小時）后換液繼續培養培養，換液的時間由細胞情況而定。
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