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使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉錄)反應合成 cDNA
. 按下表配制 RT 反應體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),
反應終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。
5. 70℃保溫 0 分鐘以終止反應,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。
?產品名稱:轉基因植物NPTII基因核酸檢測試劑盒價格
規格:48T/盒
類別:熒光-PCR法
運輸:低溫、避光、快遞免費送貨上門。
用途:生化實驗,合成實驗等試驗。
運輸及保存:低溫運輸,-20℃保存, 保存期限為 6 個月。
自備試劑:樣品 RNA。
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性能指標:點擊了解更多熒光-PCR法。
.試劑盒檢測特異性為00%
2. 檢測試劑盒重現性為00%
3. 靈敏度可達到03/ml
4. 有效期為6個月
注意事項:
①加入試劑的順序應*,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 5-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至0kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.~umol或0~00pmol,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
?3-啶硼片吶酯 00mL TES Buffer,0.2M,pH8.0 常溫保存
2-氨基噻唑-5-羧乙酯 250mL Thrombin Buffer 常溫保存
4-氟-3-硝苯甲酯 250mL Tissue Embedding Reagent 常溫保存
二溴新戊二醇 000mL Transfer or Electro Blotting Buffer,0X 常溫保存
4-三氟甲氧苯甲 00mL Transformation Buffer- 常溫保存
4-氨基四氫吡喃鹽鹽 00mL Transformation Buffer-2 常溫保存
Boc-beta-丙氨 00mL Tricine Buffer,0.5M pH6.5 常溫保存
多肽試劑 TCTU 00mL Tricine Buffer,0.5M pH7.0 常溫保存
5-冠醚-5 00mL Tricine Buffer,0.5M pH7.4 常溫保存
3-氟苯乙 00mL Tricine Buffer,0.5M,pH8.0 常溫保存
5-氟-2-基甲 00mL Tricine Buffer,0.5M,pH8.5 常溫保存
L-丙氨胺鹽鹽 00mL Tricine Buffer,0.5M,pH9.0 常溫保存
4-三氟甲氧苯 500mL Tricine Buffered Saline,5X,pH7.0 常溫保存
6-氯-3-基啶 500mL Tricine Buffered Saline,5X,pH7.4 常溫保存
2-氯-4-基啶 2500mL Tricine Buffered Saline,5X,pH8.0 常溫保存
轉基因植物NPTII基因核酸檢測試劑盒價格Cq(Complement q) 人補體q CAS: 76350-28-2 規格: 50mg
GP- IV (platelet membrane glycoprotein IV ) 人血小板膜糖蛋白Ⅳ CAS: 2276-90-6 規格: 200mg
Thymosin Alpha 人α CAS: 8777-40-2 規格: 200mg
CCP(complement control protein) 人補體調節蛋白 CAS: 7680-93-9 規格: 50mg
PBP/CXCL7(platelet basic protein) 人血小板堿性蛋白 CAS: 0457-96-6 規格: 50mg
HLA-C(leukocyte antigen C) 人類白細胞抗原C CAS: 5907-64-0 規格: 00mg
HLA-E(leukocyte antigen E) 人類白細胞抗原E CAS: 07793-72-6 規格: 400mg
HLA-A(leukocyte antigen A) 人類白細胞抗原A CAS: 2287-58-5 規格: 00mg
SAP(Serum amyloid P) 人血清淀粉樣蛋白P CAS: 22-56-3 規格: 200mg
MBLR(Mannma binding lectin receptor) 人甘露糖凝集素受體 CAS: 66985-7-9 規格: 00mg
PL/Fbn(plasmin/fibrinolysin) 人纖溶酶/纖維蛋白溶酶 CAS: 58005-8-8 規格: 0mg
BCR(B cell receptor) 人B細胞受體 CAS: 58073-59-9 規格: 0mg
mIgM(membrane IgM) 人表面膜免疫球蛋白M CAS: 552-63-6 規格: 5mg
mIgD(membrane IgD) 人表面膜免疫球蛋白D CAS: 36572-09-3 規格: 00mg
KIR(killer cell immnoglobulin-like receptor) 人殺傷細胞免疫球蛋白樣受體 CAS: 9685-09-7 規格: 0mg
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