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使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉錄)反應合成 cDNA
. 按下表配制 RT 反應體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),
反應終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。
5. 70℃保溫 0 分鐘以終止反應,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。
?產品名稱:轉基因大豆EPSPS基因核酸檢測試劑盒
規格:48T/盒
類別:熒光-PCR法
運輸:低溫、避光、快遞免費送貨上門。
用途:生化實驗,合成實驗等試驗。
運輸及保存:低溫運輸,-20℃保存, 保存期限為 6 個月。
自備試劑:樣品 RNA。
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性能指標:點擊了解更多熒光-PCR法。
.試劑盒檢測特異性為00%
2. 檢測試劑盒重現性為00%
3. 靈敏度可達到03/ml
4. 有效期為6個月
注意事項:
①加入試劑的順序應*,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 5-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至0kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.~umol或0~00pmol,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
?3-氟-4-溴-苯乙酮 500mL Sodium Phosphate Buffer,0.2M,pH8.5 常溫保存
三乙基膦酰乙酯 500mL Sodium Phosphate Buffer,0.2M,pH9.0 常溫保存
多聚甲 500mL Sodium Phosphate Buffer,0.2M,pH9.5 常溫保存
丙烯縮二乙醇 250mL Sodium Phosphate Buffer,0.5M,pH7.0 常溫保存
,2,4-丁三醇 250mL Sodium Phosphate Buffer,0.5M,pH7.4 常溫保存
分子篩 250mL Sodium Phosphate Buffer,0.5M,pH7.5 常溫保存
2-氯-4,6-二基啶 250mL Sodium Phosphate Buffer,0.5M,pH7.6 常溫保存
鈦乙酯 250mL Sodium Phosphate Buffer,0.5M,pH8.0 常溫保存
N-叔丁氧羰基-L-谷氨 -芐酯 250mL Sodium Phosphate Buffer,0.5M,pH8.5 常溫保存
Boc-L-天冬氨 -芐酯 250mL Sodium Phosphate Buffer,0.5M,pH9.0 常溫保存
4-氨基-2,5-二基酚 250mL Sodium Phosphate Buffer,0.5M,pH9.5 常溫保存
5-氨基--基吡唑-4-甲乙酯 00mL Sodium Pyrophosphate Solution,200mM 常溫保存
3-(三氟基)苯鹽鹽 500mL Sodium-free Lactated Buffered Ringer’s Solution 常溫保存
四丁基化銨 000mL SSC,20X 常溫保存
苯甲砜 000mL SSPE,20X,pH7.4 常溫保存
轉基因大豆EPSPS基因核酸檢測試劑盒ADP(Adenosine diphosphate) 人二磷腺苷 CAS: 82240-09-3 規格: 25mg
PG(Proteoglycan) 人蛋白聚糖 CAS: 56-29- 規格: 500mg
PYD(Pyridinoline) 人吡啶酚 CAS: 532-76-3 規格: g
5-HIAA(5-hydroxyindolacetic acid) 人5羥基吲哚乙 CAS: 07-4-5 規格: 25mg
2-HETE(20-hydroxyeicosatetraenoic acid) 人2羥二十烷四烯 CAS: 36-77-6 規格: 200mg
Hyp(hydroxyproline) 人羥脯氨 CAS: 7-00- 規格: 200mg
NO(nitric oxide) 人一氧化氮 CAS: 56-92-8 規格: 250mg
ENA-78/CXCL5(Epithelial neutrophil activating peptide 78) 人上皮中性粒細胞活化肽78 CAS: 5-56-9 規格: 200mg
VC(Vitamin C) 人 CAS: 80-49-9 規格: 250mg
VB6(Vitamin B6) 人6 CAS: 9003-07-0 規格: 3 strips
sP-selectin(soluble P-selectin) 人可溶性P選擇素 CAS: 8-56-9 規格: 500mg
TIMP-(tissue inhibitors of metalloproteinase ) 人基質金屬蛋白酶抑制因子 CAS: 304-20- 規格: 200mg
VD(Vitamin D) 人 CAS: 8-08- 規格: 0mg
VK(Vitamin K) 人 CAS: 58-93-5 規格: 200mg
VB2(Vitamin B2) 人2 CAS: 35-09- 規格: 200mg
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