磷酸鈣法轉染HEK293T細胞

2012年07月27日 15:41:31人氣：1488來源：上海都宜生物科技有限公司

磷酸鈣法轉染HEK293T細胞

一.試劑配制

無菌水ddw：高溫滅菌；分裝；

2XHBS： 280mM NaCl

10mM KCl

1.5 mM Na2HPO4

12 mM glucose

50 mM HEPES

Adjust the pH , every 0.05pH from 7.00 to 7.45 using 10N NaOH, then add ddw. to the final volume. 過濾滅菌，分裝；

2M CaCl2：過濾滅菌，分裝。

二. 實驗過程：

1. 鋪細胞：選擇狀態良好的293T細胞傳代， 2-3x105個細胞/35mm dish。

2. 20-24h后，待細胞長至鋪滿瓶底約50-70%的時候，進行轉染。下面就35mm dish為例，采用以下轉染體系：

ddw： 105ul

plasmid： 2 ug （如0.5ug/ul，即用4ul）

2M CaCl2： 16.5ul

2XHBS： 125ul

按上述順序，往eppendorf管中依次加入上述四種試劑。

先將前三者混勻， zui后加2XHBS。

一種方法是，加2XHBS時要逐滴加入，吹打至微現乳白色，立即均勻滴入培養皿，輕輕搖勻后置于培養箱中，6-8h后換液。

另一種方法是，加入2XHBS后立即吹打約40下（不過這個要根據每個人的力道和吹打的頻率而定，建議做一個梯度實驗，吹打不同的次數看哪次的轉染效率高以后就按這個次數來吹打），之后步驟同上，立即均勻滴入培養皿，輕輕搖勻后置于培養箱中，6-8h后換液。

關鍵詞：培養箱

全年征稿/資訊合作 聯系郵箱：hbzhan@vip.qq.com

版權與免責聲明: 1、凡本網注明"來源：環保在線"的所有作品，版權均屬于環保在線，轉載請必須注明環保在線，http://www.gc05.cc。違反者本網將追究相關法律責任。; 2、企業發布的公司新聞、技術文章、資料下載等內容，如涉及侵權、違規遭投訴的，一律由發布企業自行承擔責任，本網有權刪除內容并追溯責任。; 3、本網轉載并注明自其它來源的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網贊同其觀點或證實其內容的真實性，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時，必須保留本網注明的作品來源，并自負版權等法律責任。; 4、如涉及作品內容、版權等問題，請在作品發表之日起一周內與本網聯系，否則視為放棄相關權利。

上海都宜生物科技有限公司作者

企業直播推薦更多>>

產品推薦更多>>