基于特異性抗體的沙門菌病免疫學檢測方法

    （1）免疫酶技術  在實踐中，ELISA作為一種沙門菌檢測的高敏感性檢測技術，由于其安全性、簡便性等方面的優點，使其在臨床檢驗以及科研中被廣泛應用。

    文其乙等應用王志亮研制的沙門菌屬特異性單抗CB8和de7建立了檢測沙門菌的直接ELISA方法，即用被檢樣品直接包被酶標板，固定后加酶標屬特異性單抗，作用一定時間后，加入底物呈色后終止反應。目前已成功地應用于蛋品、鮮奶、肉晶中沙門菌的檢測，該方法與傳統方法相比，敏感性和特異性均達到理想效果。

    抗原捕獲ELISA是用特異性的單克隆抗體包被酶標板，加人待檢樣品，是樣品中的抗原捕獲抗體的基礎上發展起來的一種新的檢測技術。Riad等用此方法對66份牛糞樣品進行鼠傷寒沙門菌檢測，被檢樣品中24．2％為陽性，與直接ELISA方法19．7％的陽性檢出率相比，更加靈敏。

    目前，國外開發出一種沙門菌自動酶標免疫檢測儀，其原理是用酶熒光分析技術通過固相吸附器，用已知抗體捕捉目標生物體，然后以帶熒光的酶聯抗體再次結合，經充分沖洗后，通過激發光源檢測，即能自動讀出發光的陽性標本，其對沙門菌的檢測的結果比較穩定，已先后被美國FDA、AOAC、USDA等部門認可。

    （2）免疫熒光技術  用于快速檢測細菌的熒光抗體技術主要有直接法和間接法。直接法是在檢測樣品上直接滴加已知特異性熒光標記的抗血清，經洗滌后在熒光顯微鏡下觀察結果。間接法是在檢樣上滴加已知的細菌特異性抗體，作用后經洗滌，再加入熒光標記的第二抗體。

    孫洋等利用吖啶橙標記沙門菌屬特異性抗血清，用吖啶橙免疫熒光菌團培養法檢測沙門菌，證明該檢測方法與枯草桿菌、大腸埃希桿菌等八種雜菌均不形成菌團交叉，與雜菌的濃度比在1：640內均不受干擾，在30h內即可獲得結果。縮短了檢測時間，而且具有敏感性高、特異性強、簡便快速等優點。Cloak等將待檢樣品吸附于玻璃斜面的一種薄膜上，然后用免疫熒光顯微鏡進行結果判定，該方法可檢測到1Xl0³個／ml。

    （3）免疫膠體金技術  免疫金滲濾法是20世紀90年代初期發展起來的以膠體金為標記物的簡便、快速的檢測方法，它綜合了膠體金自身顯色、與蛋白質物理吸附而不影響吸附分子的生物活性、性質穩定等一系列優點，以硝酸纖維素膜為載體，利用微孔濾膜的可濾過性使抗原—抗體反應和洗滌在這一特殊的滲濾裝置上以液體滲濾過膜的方式，迅速完成，簡化了操作步驟，縮短了檢測的時間。

    曹春梅等利用針對沙門菌09抗原單克隆抗體和膠體金標記親和純化的羊抗鼠IgG，建立了一種以微孔濾膜為固相載體，快速檢測沙門菌09抗原的斑點免疫金滲濾法。沙門菌點膜，加入單抗，洗滌后再加入膠體金標記的羊抗鼠IgG，陽性結果呈紅色圓點，陰性結果無顏色整個檢測過程僅需10min。腸炎沙門菌標準菌株測定該方法靈敏度為6X10⁴CFU／點。該方法可檢測所有已知含09抗原的沙門菌，而不與其他沙門菌、腸桿菌科其他細菌和常見革蘭陽性細菌反應。

    （4）免疫色譜技術  的沙門菌免疫學快速檢測，利用經特異性抗體敏化的免疫色譜卡片為基礎。幾滴樣品加到卡片上，結果可以直接用肉眼讀出。免疫色譜卡片極易操作，且由于不需要特殊設備，很適合小型實驗室使用。盡管卡片檢測法與·ELISA法一樣需要對樣品進行增菌處理，但卡片法檢測耗時不超過10rain。

    （5）乳膠凝集技術  將特異性的抗體包被在乳膠顆粒表面，通過抗體與相應的沙門菌抗原結合，產生肉眼可見的凝集反應。通常此法需獲得細菌的純培養物，再將培養物與致敏乳膠反應。目前FDA認可的產品有Bactigen、Spectate、Microscreen、Serobact等。