熱穩定腸毒素（ST）的快速檢測與鑒定

 

    （1）ELISA檢測ST  De．Mai等（1983）以過氧化物酶標記抗體，用抗原競爭間接法檢測培養液中STl。定性檢測時底物用5—氨基水楊酸，定量時用鄰苯二胺。此法與乳鼠試驗的相符率為96．7％，無假陽性。‘Thompson等（1984）建立了一種快速ELISA，經提高酶標記抗體濃度和競爭作用溫度以及減少底物用量后，可使檢測ST的時間縮短至lh。當用單抗時，該法對ST的檢出限可達3pg／m1。Klipstein等以人工合成的ST（s）和ST（c）分別與豬IgG偶聯后，并制成兔和羊抗ST血清，還以此建立了檢測ST的雙夾心ELISA。該法*抗體為兔抗ST血清，第二抗體用羊抗ST血清。如用純化的抗ST（c）抗體作為*抗體、第二抗體，則對ST檢測限為140pg／m1，比下降為乳鼠法的1／280，比粗制ST（s）抗體的檢測敏感性增高2857倍，對50株人源ST陽性檢出率為100％，無一假陽性。本法還可檢測豬源ST。

 

    （2）放射免疫法  Giannetla等（1981）以改良的過氧化物酶法標記純化STl，用抗原競爭法檢測待檢菌培養上清液中的STl，其檢測限為50pg／m1的STl，特異性強，重復性亦好，不同時間測定的誤差不大于5％，對STl和胃腸道多肽均無交叉反應。Frant等將豬源菌株431所產的ST與牛血清白蛋白或血藍蛋白偶聯后，制成兔抗ST血清，另以¹²⁵I標記的該菌株ST作為檢測標記物，通過待檢ST對標記物的競爭抑制來測定樣品中ST含量，其檢測限達50pg每反應管，整個試驗可在一天內完成。此法可檢測豬、牛和人源的STl，對IrT及STl均無反應，且對STl的定量與乳鼠法所得的結果呈高度相關。

 

    （3）GMl—ELlSA  Svennerhotm等研制出抗STl的單抗，并以此建立了檢測ST的GMl—ELISA。其主要步驟為將ST與CT的B亞單位（CT-B）偶聯，再把偶聯物結合到用GMl包被的酶標板上，將待檢樣品和ST標準樣品分別稀釋后，再各自與抗ST單抗在室溫下作用1h，加入上述板孔中，再加入HRP標記的抗鼠免疫球蛋白，顯色，測OD值。如待檢菌株培養液濾液能≥50％抑制抗ST單抗與GMl—ST-CTB結合反應即判為陽性。通過與陽性反應的ST標準的稀釋度做比較還可確定樣品中ST的濃度。此法既能檢測ST 1a，又可檢測STl，對純化ST的檢測限為0．2～0．4ng，其敏感性高于乳鼠試驗。但對乳鼠法中呈陽性反應的腸結腸炎耶爾森菌的ST卻不起反應。