上海永葉生物科技有限公司作者
實驗所用主要為組織標本和細胞標本兩大類,前者包括石蠟切片(病理大片和組織芯片)和冰凍切片,后者包括組織印片、細胞爬片和細胞涂片。
其中石蠟切片是制作組織標本zui常用、zui基本的方法,對于組織形態保存好,且能作連續切片,有利于各種染色對照觀察;還能長期存檔,供回顧性研究;石蠟切片制作過程對組織內抗原暴露有一定的影響,但可進行抗原修復,是免疫組化中的組織標本制作方法。
石蠟切片為什么要做抗原修復?有哪些方法?
石蠟切片標本均用甲醛固定,使得細胞內抗原形成醛鍵、羧甲鍵而被封閉了部分抗原決定簇,同時蛋白之間發生交聯而使抗原決定簇隱蔽。所以要求在進行IHC染色時,需要*行抗原修復或暴露,即將固定時分子之間所形成的交聯破壞,而恢復抗原的原有空間形態。
常用的抗原修復方法有微波修復法,高壓加熱法,酶消化法,水煮加熱法等,常用的修復液是pH6.0的0.01 mol/L的檸檬酸鹽緩沖液。
免疫組化常用的染色方法有哪些?
根據標記物的不同分為免疫熒光法,免疫酶標法,親和組織化學法,后者是以一種物質對某種組織成分具有高度親合力為基礎的檢測方法。這種方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗體)在細胞或亞細胞水平的定位,其中*——抗*染色法zui常用。
抗體的保存:
抗體儲存容器應由不吸附蛋白質的材料制成,常用的有聚丙烯,聚碳酸酯和硼硅酸玻璃。如儲存的抗體中蛋白濃度很低(10-100mg/L),就應另加隔離蛋白以減少容器對抗體蛋白的吸附,隔離蛋白常用0.1%-1.0%的牛血清白蛋白。絕大多數已稀釋的抗體應存在4℃-8℃條件下,以免凍融對抗體蛋白產生有害效應。抗體原液和已分離的免疫球蛋白組分應保存于-20℃條件下,并避免反復凍融。冷凍的抗體溶液應置于室溫中緩慢地解凍,應避免用高溫快速解凍。被細菌污染的抗體常會出現假陽性結果,應將污染的抗體溶液及其他試劑棄之。為防止細菌污染,可于抗體溶液中加入0.01%疊氮鈉。抗體經真空冷凍干燥后置-20℃以下可保存3-5年。保存稀釋后的單抗應加入0.1%疊氮鈉濃度。大多數稀釋抗體可進行冷凍保存,少數抗體可能會丟失抗原活性。大多數單抗,只要蛋白濃度適當,可在4℃下保存數月。
多聚賴氨酸溶液(Poly-L-Lysine Solution)
Cat.No.: SGP8920 Size: 10ml
Conc.: 0.1% w/v, in water Storage: 18-26℃
Thimerosal, 0.01%, added as preservative
多聚賴氨酸溶液是廣泛應用的組織切片與玻片黏合劑,該多聚陽離子分子與組織切片上的陰離子相互作用會產生較強的黏合力。
適用組織學,免疫組織化學,冰凍切片,細胞涂片,原位雜交等使用的玻片的防脫片處理,以防實驗操作過程中組織掉片。也可用于細胞培養,增加細胞貼壁能力。
[使用說明]
免疫學
操作步驟(可直接在玻片上涂布)
1. 滅菌的ddH2O 1:10稀釋該多聚賴氨酸溶液。
2. 用之前將稀釋的多聚賴氨酸溶液放在室內,使其溫度到室溫18-26℃
3. 將玻片浸在稀釋的多聚賴氨酸溶液5分鐘。注意增加時間不會提高包被效果。
4.在60℃烘箱1小時干燥,或室溫18-26℃過夜干燥待用。
[注意]
1. 每100mL已稀釋的多聚賴氨酸溶液要包被的玻片40-90張,超過90張片子將影響其黏合力。
2. 用之前的玻片必須保持清潔。必要時用含1% HCl的70%乙醇溶液來清洗。
4. 釋過的多聚賴氨酸溶液要放在2-8℃,至少在3個月內是穩定的。
5. 用過的稀釋液要過濾,若出現渾濁或長菌要丟棄。
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