SMC-1胸膜細胞瘤上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)SMC-1胸膜細胞瘤:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
1-broMohenicosafluorodecane 1-溴全氟癸烷 307-43-7
1DisodiuM 4-aMino-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonate 3963-80-2
1g 479024-70-9
3-[(TERT-BUTOXYCARBONYL)AMINO]-3-CYCLOPENTYLPROPANOIC ACID 776330-74-6
1g 5g 4919-00-0
1g 5g 4-*唑啉-7-甲酸 942507-89-3
1g 5g 10g 6041-23-2
1g, 2 5 500Mg 3,3'-(羥基亞硝基肼)二-1-丙胺 146724-95-0
1g, 2g, 5g 2-氟丙烯酸 430-99-9
1g,2g,5g 2-甲基-1-苯基哌嗪 2946-76-1
1g/850 934505-32-5
1g/2100 2,7-二溴菲醌 84405-44-7
1g? 5g 74528-53-3
1g-5g 原人參二醇 2302-51-9
1H-1,2,4-Triazole,5-fluoro-(9CI) 42297-29-0
1H-2-Benzopyran-1-one 異薰草素 491-31-6
1H-Benz[de]isoquinoline-5,8-disulfonicacid, 7-aMino-2-(5-aMinopentyl)-2,3-dihydro-1,3-dioxo-, potassiuM salt (1:2) 149733-79-9
1H-BENZIMIDAZOL-2-AMINE,4,7-DIMETHYL- 67468-93-3
2-Phenyl-1H-benzoiMidazol-5-ylaMine 2-苯基-1H-苯并咪唑-5-基胺 1767-25-5
1H-BENZIMIDAZOLE, 3A,4,5,6,7,7A-HEXAHYDRO- 2018-50-0
1H-BenziMidazole-2-carboxaldehyde 苯并咪唑-2-甲醛 3314-30-5
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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