PC-12腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體PC-12腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞):
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
Polybutyleneglycol bis(4-benzoylphenoxy)acetate 聚丁二醇250二-(2-羧甲氧基苯甲酮)酯 515136-48-8
POLYETHYLENEIMINE, BRANCHED 聚乙烯亞氨 9002-98-6
PolyhexaMethylene biguanide (PHMB) 聚(六亞甲基雙氰基胍-六亞甲基二胺)鹽酸鹽 27083-27-8
Poly(iMinocarboniMidoyliMinocarboniMidoyliMi,6-hexanediyl) 28757-47-3
Poly(iMinocarboniMidoyliMinocarboniMidoyliMi,6-hexanediyl) hydrochloride 聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽 32289-58-0
POLY(ISOBUTYLENE) 聚異丁烯 9003-27-4
Poly(lactic acid) 3,6-二甲基-1,4-二惡烷-2,5-二酮聚合物 26680-10-4
Polyaspartic Acid 聚天冬氨酸鈉 181828-06-8
POLYBUTADIENE DIACRYLATE 聚丁二烯 9003-17-2
polycaprolactone Mw 100,000-190,000 聚己內酯 25248-42-4
polycarbophil 聚卡波非 9003-97-8
polydiMethylsiloxane 硅油 63148-62-9
Polyepichlorohydrin 環氧樹脂 24969-06-0
POLY-EPSILON-CBZ-L-LYSINE N'-芐氧羰基-L-賴氨酸聚合物 25931-47-9
Polyethylene glycol Methacrylate phosphate 聚乙二醇甲基丙烯酸磷酸酯 35705-94-3
Polyethylene glycol Monolaurate 聚乙二醇單月桂酸酯 9004-81-3
PiMecroliMus 吡美莫司 137071-32-0
英文名稱 中文名稱 CAS號
PeMirolast 吡嘧司特 69372-19-6
Penduletin PENDULETIN 569-80-2
Penicillin 阿地西林 525-94-0
Penicillin aMidase *(酰胺)酶 9014/6/6
Penicillin G sodiuM salt *鈉 69-57-8
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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