A9皮下結締組織細胞 上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)A9皮下結締組織細胞 :
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞 ,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
Nepetalactone 假荊芥內酯 21651-62-7
N-(2-Hydroxypropyl) MethacrylaMide N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺 21442-01-3
N-(2-Mercaptopropionyl)glycine * 1953/2/2
N-(3-(AMinoMethyl)pyridin-2-yl)-N-MethylMethanesulfonaMide N-(3-(氨基甲基)吡啶-2-基)-N-甲基甲烷磺酰胺 939791-42-1
PrenylaMine lactate 69-43-2
N-(3-aMino-4-ethoxyphenyl)acetaMide 3-氨基-4-乙氧基-乙酰苯胺 17026-81-2
N-(3-AMinopropyl)MethacrylaMide hydroChloride N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酸鹽 鹽酸鹽 72607-53-5
N-(3-BroMopropyl)phthaliMide N-(3-溴丙基)苯二胺 5460-29-7
N-(4-(4-fluorophenyl)-5-((E)-2-((2S,4R)-4-hydroxy-6-oxotetrahydro-2H-pyran-2-yl)vinyl)-6-isopropylpyriMidin-2-yl)-N-MethylMethanesulfonaMide *-5S-內酯 503610-43-3
N-(6-AMinohexyl)MaleiMide hydrochloride salt N-(6-氨基己基)馬來酰亞胺鹽酸鹽 75238-09-4
N-(carboxyMethyl)-N-[2-(2,5-dihydro-2,5-dioxo-1H-pyrrol-1-yl)ethyl]- Glycine 207612-92-8
N,N'-Bis(2,4,6-triMethylphenyl)ethane-1,2-diaMine N,N'-二(2,4,6-*基苯基)乙二胺 134030-21-0
N,N'-Bis(2-hydroxyethyl)-1,3-propanediaMine N,N'-二(2-羥乙基)-1,3-丙二胺 10563-27-6
N,N'-Bis(2-hydroxyethyl)ethylene diaMine N,N-Bis(2-羥乙基)乙二胺 4439-20-7
Trilon M Liquid 二羧甲基*三鈉 164462-16-2
N,N-BIS(CARBOXYMETHYL)-L-GLUTAMIC ACID TETRASODIUM SALT *二乙酸四鈉 51981-21-6
N,N-Bis(salicylidene)-o-phenylenediaMine VanadiuM(IV) oxide CoMplex 32065-17-1
N,N'-bis(salicylideneaMino)ethane-Manganese(II) N,N'-雙(亞水楊基)-1,2-乙二胺-錳(II) 53177-12-1
N,N'-Di(1-naphthyl)-4,4'-benzidine N,N'-二(1-萘基)-4,4'-聯苯二胺 152670-41-2
N,N'-DIACETYLCHITOBIOSE N,N'-二乙?;鶜ざ?nbsp;35061-50-8
N,N'-Dibutyl-perylene-3,4,9,10-tetracarboxylic acid diiMide PTCDI-C4 76372-76-4
N,N-Dicyclohexyl-2-benzothiazolsulfene aMide N,N-二環己基-2-苯并噻唑次磺酰胺 4979-32-2
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
暫無信息 |