【中文名稱】： 人Toll樣受體4 Elisa試劑盒

【英文名稱】： Human Toll like receptor 4 Elisa Kit

【產品規格】：96T/48T

【保存條件】：2-8℃低溫保存

【保質期】：6個月，所有試劑盒均提供批次。

【試劑盒成分】：酶標板，試劑，標準品等。 

用于科研方面，不用于臨床診斷

人Toll樣受體4 Elisa試劑盒注意事項：

　　1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫均衡15-30分鐘后方可運用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

　　2. 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

　　3. 各步加樣均應使用加樣器，并常常校對其準確性，以避免實驗誤差。一次加樣時日控制在5分鐘內，如標本數量多，舉薦使用排槍加樣。

　　4. 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣板OD值大于標準品孔*孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋必定倍數(n倍)后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

　　5. 封板膜只限一次性使用，以避免穿插污染。

操作步驟

　　1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為1200pg/ml，800pg/ml ，400pg/ml，200pg/ml，100pg/ml)。

　　2. 加樣：分別設空白孔(空白比照孔不加樣品及酶標試劑，其他各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不涉及孔壁，輕輕晃動混勻。

　　3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

　　4. 配液：將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

　5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

　　6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

　　7. 溫育：操作同3。

　　8. 洗滌：操作同5。

　　9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

　　10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。

　　11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序丈量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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