Probes for reactive oxygen species（活性氧ROS探針）技術專題
Aminophenyl fluorescein (APF) 氨基苯基熒光素
Hydroxyphenyl fluorescein (HPF) 羥苯基熒光素
專題關鍵詞：
Aminophenyl fluorescein (APF)；Hydroxyphenyl fluorescein (HPF)；Reactive oxygen species (ROS) 活性氧物質；DCFH-DA；CAS：359010-69-8；
基本描述：
氨基苯基熒光素（APF）和羥苯基熒光素（HPF）是由T. Nagano開發的兩種活性氧（Reactive oxygen species, ROS）指示劑，比H2DCFDA（DCFH-DA, DCFH）具更的特異性和穩定性。APF和HPF顯示有限的非選擇性反應，和相對較高的光誘導氧化抗性。APF和HPF具細胞膜滲透性，本身無熒光，直到與羥基自由基或過氧亞硝基陰離子反應，還能與次氯酸陰離子反應，產生強綠色熒光（Ex/Em，~490/515nm），可用熒光顯微鏡、高通量成像儀、熒光酶標板或流式細胞儀檢測。
工作原理：
中性溶液中氨基苯基熒光素（APF）和羥苯基熒光素（HPF）幾乎是無熒光，當與高活性氧物質（highly reactive oxygen species, hROS）反應，能夠生成具有高熒光強度的熒光素（Ex/Em, 490/515nm），且能觀察到熒光強度的增加【見下反應原理圖】。
探針特征：
□ APF，HPF選擇性檢測hROS比如羥基自由基（HO•）和過氧亞硝基陰離子（ONOO–），但不會與其他活性氧物質反應（•O2–,1O2, H2O2, NO等）；
□ 通過加入辣根過氧化物酶（HRP）能定量測定過氧化氫H2O2;
□ 結合使用HPF和APF能特異性檢測次氯酸（OCl-）;
□ HPF和APF本身根本不會自氧化，從而與其他試劑相比能得到更可靠的數據；
□ 能對活細胞進行成像檢測；
ROS探針檢測特異性比較：
□ 試劑配制：1mg HPF/APF分別溶于DMF配制成5mM儲存液。使用前用磷酸鹽溶液（0.1M, pH 7.4）稀釋500~5000倍（10～1μM）。將稀釋液加入樣本并孵育，然后測定熒光值（Ex/Em, 490/515nm）。
□ 磷酸鹽緩沖液體系（0.1M, pH 7.4），每一種熒光試劑（終濃度：10mM，0.1% DMF用作共溶劑）與各種活性氧物質反應。
□ HPF（Ex/Em=490/515nm）, APF（Ex/Em=490/515nm）, DCFH（Ex/Em=500/520nm）的熒光強度測定。
表1. 活性氧探針（HPF, APF, DCFH）對各種活性氧物質的反應特異性
ROS | HPF (MX4805-1MG) | APF (MX4804-1MG) | DCFH (MX4802-50MG) |
HO• | 730 | 1200 | 7400 |
ONOO– | 120 | 560 | 6600 |
OCl- | 6 | 3600 | 86 |
1O2 | 5 | 9 | 26 |
•O2– | 8 | 6 | 67 |
H2O2 | 2 | ＜1 | 190 |
NO | 6 | ＜1 | 150 |
ROO• | 17 | 2 | 710 |
Autoxidation | ＜1 | ＜1 | 2000 |
ROS探針應用示例：
示例1：細胞經光誘導的自氧化檢測（Light-induced autoxidation in cells）
1.1 探針加量：37℃避光孵育細胞30min，HPF或DCFH-DA（10mM each）
1.2 熒光測定：共聚焦顯微鏡觀察熒光（激發波長488nm，檢測波長＞515nm）；488nm波長輻射刺激細胞10s，然后再測定熒光。
1.3 實驗圖片：
示例2：豬中性粒細胞的體內成像（Bioimaging of porcine neutrophils）
2.1 豬中性粒細胞的純化
a）從豬血中純化中性粒細胞；b）將純化的中性粒細胞溶于KRPD緩沖液（Krebs-Ringer phosphate buffer）(114 mM NaCl, 4.6 mM KCl, 2.4 mM MgSO4, 1.0 mM CaCl2, 15 mM NaH2PO4/Na2HPO4, pH 7.4)，置于冰上直至使用。將其轉移到培養皿內。
2.2 探針加載與PMA刺激
a）加10mM HPF或APF到細胞，室溫孵育30min。b）加入佛波酯PMA（2ng/ml）刺激中性粒細胞；
2.3 中性粒細胞的體內成像
刺激前或刺激后10min用共聚焦顯微鏡觀察中性粒細胞（激發波長488nm，觀察波長505nm-550nm）。
產品信息：高品質產品，現貨供應，咨詢，maokangbio內容。
貨號 | 名稱 | 規格 | 價格（元） |
MX4804-1MG | Aminophenyl fluorescein (APF) 氨基苯基熒光素 | 1mg | 2080 |
MX4805-1MG | Hydroxyphenyl fluorescein (HPF) 羥苯基熒光素 | 1mg | 2080 |
MX4802-50MG | H2DCFDA (DCFH-DA, DCFH) 活性氧（ROS）熒光探針 | 50mg | 546 |
【溫馨提示】：見我司（懋康生物）整理的Probes for reactive oxygen species（活性氧探針）產品專題。
相關產品：ROS研究常用的配套產品，需要了解更多信息咨詢，maokangbio內容。
貨號 | 名稱 | 規格 | 價格（元） |
MX4801-1KIT | Reactive Oxygen Species (ROS) Assay Kit 活性氧（ROS）檢測試劑盒 | 100~500T | 328 |
MZ2401-100UL | PMA (TPA, 5mg/ml)佛波肉荳蔻醋酸（5mg/ml） | 100μl | 280 |
MS5603-50ML | tert-Butyl hydroperoxide solution (TBHP) 叔丁基過氧化氫溶液 | 50ml | 98 |
MP5429-10MG | N-Formyl-Met-Leu-Phe (fMLP) N-甲酰-蛋氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸 | 10mg | 588 |
M36008（Invitrogen） | MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator | 50 µg | 650 |
注意事項
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供產品。
