大腸桿菌化學感受態細胞 表達分析 返回列表頁

BL21 Star (DE3) Chemically Competent Cell 

        大腸桿菌化學感受態細胞

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產品標簽：

BL21 (DE3)；Rosetta (DE3)；Rosetta (DE3)；表達感受態細胞；pET表達載體；IPTG誘導；

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【好消息】：見我司整理的BL21系列表達感受態細胞常見問題。

產品組分：

菌株描述

BL21 Star (DE3) 菌株來源于BL21(DE3)菌株，DE3命名表明該菌株染色體上整合λ噬菌體DE3溶原體（其上攜帶lacUV5啟動子調控的T7 RNA聚合酶基因），IPTG用來誘導T7 RNA聚合酶的表達。該菌株攜帶一突變的rne基因（rne131），編碼合成截短的RNase E，此酶喪失mRNA降解能力從而提高mRNA轉錄體的穩定性和增加蛋白產量。另外，BL21 Star (DE3)是大腸桿菌B/r菌株，缺乏lon和外膜蛋白酶OmpT，降低外源重組蛋白的被降解，進一步增加了蛋白表達率。BL21 Star (DE3) 菌株特別設計適用于低拷貝，T7啟動子表達載體的非毒性蛋白的高水平表達。與BL21菌株相比， mRNA穩定性提高，BL21 Star菌株由于提高的mRNA穩定性，呈現出更高的異源基因基礎表達，因此不適合毒性蛋白表達。

BL21 Star (DE3) 菌株基因型：F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm rne131(DE3)

產品描述

本品是大腸桿菌BL21 Star (DE3)菌株經特殊工藝制作所得的感受態細胞，可用于DNA的熱擊轉化。經pUC19質粒檢測轉化效率可達108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存幾個月轉化效率不發生改變。

保存與運輸條件：

保存：-80℃保存，六個月有效。

運輸：干冰運輸。

注意事項

1）   感受態細胞必須用干冰運輸。感受態細胞應在-80℃保存，不可反復凍融且放置時間過長，否則會減低感受態細胞的轉化效率。

2）   最好在冰上融化感受態細胞。

3）   進行轉化操作時，需在相應溫度及無菌條件下進行。

4）   為防止轉化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，將損失降到zui低。

5）   產品包裝內含質粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實驗用。

6）   為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】

1）   取感受態細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管內，置于冰浴中?！咀⒁猓阂淮无D化感受態細胞的建議用量為50-100 μl，可以根據實際情況分裝使用。需注意所用DNA體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一?！?/p>

以下實驗以100 μl感受態細胞為例。

2）   向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻（或用手輕彈管輕輕混勻），冰浴靜置30min。

3）   42℃熱激45s，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3min。此過程不要搖動離心管。

4）   向每個離心管中加700 μl無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養60min，目的使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

5）   根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12-16h。

【注意】：

a）涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可取少量轉化產物涂布平板；反之，若轉化的DNA總量較少，可取200-300 μl轉化產物涂布平板。若預計的克隆較少，可通過離心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。

b）新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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