豬K99酶聯免疫分析(ELISA)

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供科研使用。

本試劑盒用于體外檢測人血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中相關含量或活性。

有效期：6個月

保存條件：2-8℃

酶聯免疫吸附實驗（ELISA）實驗原理：

本試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知待測物質濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將待測物質和*標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質的濃度呈比例關系。

豬K99elisa試劑盒現貨組成：

ELISA酶標板（可拆卸）       Micro ELISA  Plate(Dismountable)         96T/48T   4℃/-20℃ #

凍干標準品     Reference Standard                2/1 支     4℃/-20℃ #

標準品&樣品稀釋液      Reference Standard & Sample Diluent             1瓶 20mL/12mL     4℃

濃縮*化抗體         Concentrated Biotinylated Detection Ab         1支 120μL/70μL          4℃

*化抗體稀釋液     Biotinytated Detection Ab Diluent           1瓶 10mL/6mL       4℃

濃縮HRP酶結合物         Concentrated HRP Conjugate          1支 120μL/70μL          4℃(避光)

酶結合物稀釋液     HRP Conjugate Diluent    1瓶 10mL/6mL       4℃

濃縮洗滌液（25×）     Concentrated Wash Buffer (25×)  Concentrated Wash Buffer (25×)  4℃

底物溶液（TMB）                   Substrate Reagent           1瓶 10mL/6mL       4℃(避光)

反應終止液     Stop Solution    1瓶 10mL/6mL       4℃

封板覆膜         Plate Sealer      2 張        

產品說明書     Product  Description      1 份

豬K99elisa試劑盒現貨樣品收集、處理及保存方法

1）血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2）血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3）細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4）組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液

5）保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

操作注意事項

1）試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

2）實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

3）不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

4）使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5）使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6）洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

7）底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

8）加入試劑的順序應*，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

9）按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

操作步驟:

(1)使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。

(2)根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。

(3)加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的*標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

(4)甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

(5)每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

(6)甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

(7)每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

(8)取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。

(9)在450nm波長處測定各孔的OD值。

結果判斷與分析

1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的待測物質標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的待測物質含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

試劑盒性能

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。

2. 特異性：不與其它細胞因子反應。

3. 重復性：板內、板間變異系數均小于10%。