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上海莼試生物技術有限公司
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抗補體C3小鼠雜交瘤細胞；2A10?實驗方法和步驟
2024-7-31 閱讀(23)
抗補體C3小鼠雜交瘤細胞；2A10實驗方法和步驟:
(一) 前處理 用臺稱稱量青蛙或蟾蜍的體重，然后按10微克／克動物體重的劑量,腹腔注射秋水仙素。
(二) 取材 注射4小時后，將動物處死，用剪刀剪開皮膚和肌肉，取出大腿骨和脛骨，剔凈股骨上的肌肉，然后用一小塊紗布來回搓干凈。剪開兩端股骨，用注射器（內裝5ml 1％ 檸檬酸鈉溶液）緩慢沖洗骨髓細胞到離心管中，經平衡后離心8分鐘，速度為1000轉／分鐘。
(三) 低滲 吸去上清液，留沉淀物0.2ml，加0.046M KCL 溶液至8 ml 刻度，用吸管沖勻沉淀物，在恒溫水浴(28℃)處理20分鐘或更長一點時間。
(四) 固定 低滲后，以每分鐘1000轉速度離心10分鐘。用吸管小心吸去上清液，留0.2ml沉淀物，沖散后沿管壁慢慢加入6ml固定液。 沖勻后靜止固定20分鐘。重復固定1～2次，離心的速度與時間以上述相同。
(五) 滴片 吸去上清液，留0.2ml沉淀物，加4滴新配的固定液，沖勻沉淀物。從冰箱取出預先冷凍的載片，每片滴3滴細胞懸液，立即用嘴向載片上吹氣，使細胞均勻分散，在酒精燈火焰上來回烤一下，以助染色體更好分散和展開。 (六) 染色 用10：1 Giemsa染液染色20分鐘(Giemsa原液用PH＝6.8磷酸緩沖液稀釋)，然后用水沖洗，片干后鏡檢。 (七) 鏡檢 在中倍鏡下找染色體分散好的中期分裂相，轉至高倍鏡詳細觀察兩棲類染色體的數目，屬于大、中、小染色體各有多少條。
