細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
公司產品僅用于科研以下是細胞的訂購信息：

英文簡稱：KYSE30細胞    

產品名稱：食道鱗狀細胞癌

規格：T25

形態特性：上皮樣

生長特性：貼壁生長

特征特性：

培養條件：RPMI 1640 + Ham's F12 (1:1) + 2mM Glutamine +2% FBS

傳代方法：1：5傳代

貨號：CS-X64067

細胞培養的優點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。

注意事項：
（1）凍存前細胞狀態，細胞在對數生，細胞密度適合，剛剛發生細胞融合，過密或連成片的細胞狀態不好，而且消化時不容易分散；
（2）凍存的密度不宜過低，10的6次方-7次方的數量級比較好，我凍存的細胞一般T25培養瓶（5*107），一瓶凍一管（1.5ml凍存管），10cm培養皿（大概10的8次方個細胞）分成兩管。
（3）消化和吹打，切忌消化過度，吹打不可太用力，不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。
（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很嚴格，我從10%-90%都用過，問題不大，個人認為10%-20%可以了，能節約處就節約點嘛！另外，凍存液可以在處理細胞前配置，放在4度冰箱預冷。細胞離心后直接用預冷的凍存液重懸，移入凍存管。
（5）關于“慢凍"，傳統的方法，LLC細胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長，-80度過夜，最后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數量多的實驗室，使用程序降溫盒，內裝異丙醇，在-80度并內可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。
實驗報告
一、產分離與培養：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將成1mm3左右大小；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
   5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
α-胞襯蛋白(SPTAN1)檢測試劑盒英文名稱：SPTAN1 ELISA Kit鈣連蛋白抗體包裝500g

α白蛋白(AFM)檢測試劑盒英文名稱：AFM ELISA Kit二氫嘧啶酶相關蛋白2抗體包裝50mg

α2-纖溶酶抑制因子(α2PI)檢測試劑盒英文名稱：α2PI ELISA Kit色素P450ⅡE1抗體包裝1g

α2-巨球蛋白(α2M)檢測試劑盒英文名稱：α2M ELISA Kit趨化因子受體1抗體包裝100g

α2-HS糖蛋白(αHSG)檢測試劑盒英文名稱：αHSG ELISA Kit磷酸化原癌基因c-Raf抗體包裝25g

α1-微球蛋白(α1M)檢測試劑盒英文名稱：α1M ELISA Kit磷酸化致癌基因C-Myc抗體包裝500g

α1-酸性糖蛋白(α1AGP)檢測試劑盒英文名稱：α1AGP ELISA KitCD33抗體包裝1g

α1-抗(α1AT)檢測試劑盒英文名稱：α1AT ELISA Kit磷酸化原癌基因c-kit抗體包裝5g

Zeste同源物增強子1(EZH1)檢測試劑盒英文名稱：EZH1 ELISA Kit磷酸化原癌基因c-Jun抗體包裝1g

YY肽(PYY)檢測試劑盒英文名稱：PYY ELISA Kit離子通道蛋白3抗體包裝25g

X-射線修復交叉互補蛋白6(XRCC6)檢測試劑盒英文名稱：XRCC6 ELISA Kit磷酸化周期素E抗體包裝5g

X-射線修復交叉互補蛋白5(XRCC5)檢測試劑盒英文名稱：XRCC5 ELISA Kit磷酸化分裂周期蛋白25C抗體包裝250mg

X-框結合蛋白1(XBP1)檢測試劑盒英文名稱：XBP1 ELISA Kit磷酸化周期素依賴性激酶9抗體包裝1g

Wolfram綜合征蛋白1(WFS1)檢測試劑盒英文名稱：WFS1 ELISA Kit磷酸化Connexin 43蛋白抗體包裝5g

WNT1誘導信號通道蛋白1(WISP1)檢測試劑盒英文名稱：WISP1 ELISA Kit絲切蛋白抗體包裝100g
KYSE30細胞L-腎上腺素(標準品)英文名稱： Sumatriptan succinate 順氨鉑耐藥相關蛋白9抗體包裝5g

L-(標準品)英文名稱： Streptomycin Sulphate22號染色體開放閱讀框40抗體包裝1g

L-天(標準品)英文名稱： Streptomycin Sulphate嗜酸粒趨化蛋白3抗體包裝1g

L-巖藻糖(標準品)英文名稱： Dihydrostreptomycin Sulphate21號染色體開放閱讀框33抗體包裝250mg

L-異（標準品）英文名稱： Diclofenac sodium角蛋白15抗體包裝5ml

Lenalidomide（標準品）英文名稱： Diclofenac sodium角蛋白14抗體包裝1g

Letrozole（標準品）英文名稱： Gabapentin神經NB3特定蛋白抗體包裝1g

Levonorgestrel（標準品）英文名稱： Gabapentin促胃泌素受體抗體包裝5g

Loperamide HCl(標準品)英文名稱： Domperidone單克隆抗體包裝1g

Losartan Potassium英文名稱： Domperidone2號染色體開放閱讀框72抗體包裝5g

m-酚-4-磺酸銨(聚酚磺雜質)（標準品）英文名稱： Niclosamide間粘附分子3抗體包裝1g

m-酚-4，6-二磺酸銨 （聚酚磺雜質）（標準品...英文名稱： Niclosamide染色質結合蛋白Cbx8抗體包裝1g

m-酚-6-磺酸銨(聚酚磺雜質)（標準品）英文名稱： Ciprofloxacin降鈣素抗體包裝25g

MB1120-S英文名稱： Ciprofloxacin降鈣素基因相關肽1型受體抗體包裝5g

Medroxyprogesterone acetate...英文名稱： FamciclovirCD19抗體包裝500mg