上海莼試生物技術有限公司
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參考價 | 面議 |
- 型號 50T
- 品牌 其他品牌
- 廠商性質 經銷商
- 所在地 上海市
更新時間:2022-03-30 10:41:24瀏覽次數:287
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實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務:DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術:引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
參數規格:
產品名稱:牛BGH基因PCR檢測試劑盒
產品貨號:CP99990
產品規格:50T
產品分類:熒光-PCR法
產品運輸:低溫運輸
產品保存:-20℃保存
產品有效期:一年
產品特點:本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏熒光定量 PCR 產品。
PCR反應鑒定——PCR反應條件:
循環步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
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二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
使用方法:
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標準曲線(以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭,從6號管中取5 μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭,從5號管中取5 μL溶液到4號管中,重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR(見下步),每個樣品做3次重復。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸,繪制標準曲線。
成晶節桿菌促凋亡調節蛋白BNIP3抗體Human FUT11 ELISA Kit小鼠17羥皮質類固(17-OHCS)免疫試劑盒
Phoma medicaginis var. medicaginis骨形態發生蛋白2受體抗體Human FUT4 ELISA Kit小鼠17-α(17-αMT)免疫試劑盒
腐皮鐮孢馬特變種甲狀腺激素受體共激活蛋白抗體Human FUT7 ELISA Kit小鼠16α羥基雌酮1(16-α OHE-1)免疫試劑盒
熱球狀尿素芽孢桿菌磷酸化促凋亡Bik蛋白抗體Human FUT8 ELISA Kit小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)免疫試劑盒
化妝品檢測用金黃色葡萄球菌蛋白激酶BAP135抗體Human FUT9 ELISA Kit小鼠12羥二十烷四烯酸(12-HETE)免疫試劑盒
熱吸水鏈霉菌磷酸化相關死亡促進因子抗體Human FUT7 ELISA Kit小鼠1,4,5-三磷酸肌(IP3)免疫試劑盒
釀酒酵母磷酸化Bax抗體Human FRZB ELISA Kit小鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)免疫試劑盒
豬丹絲菌Bcl-10抗體Human FSD1L ELISA Kit小鼠1,25二羥基3(1,25 DHVD3)免疫試劑盒
橄欖灰鏈霉菌原癌基因Bcl-6抗體Human FUT4 ELISA Kit豚鼠ELISA試劑盒
鏈霉菌磷酸化Bcl-10抗體Human FSCN3 ELISA Kit豚鼠組(HIS)免疫試劑盒
副豬嗜血桿菌磷酸化死亡調解子抗體Human FSD2 ELISA Kit豚鼠轉化生長因子β1(TGF-β1)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌磷酸化B-Raf抗體Human FTCD ELISA Kit豚鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)免疫試劑盒
VPI 6883 布氏瘤胃球菌磷酸化癌易感基因1抗體Human FOXS1 ELISA Kit豚鼠孕激素(progestogen)免疫試劑盒
雙孢蘑菇芳香烴受體核轉錄蛋白樣1抗體Human FRAG1 ELISA Kit豚鼠乙型肝炎病表面抗原(HBsAg)免疫試劑盒
球孢白僵菌癌易感基因復合物亞基蛋白3抗體Human FPGT ELISA Kit豚鼠乙型肝炎病表面抗體(HBsAb)免疫試劑盒
鹽古桿菌腫瘤轉移抑制蛋白BAMBI抗體Human Frizzled 2 ELISA Kit豚鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)免疫試劑盒
牛BGH基因PCR檢測試劑盒暫無Saccharomyces│boulardii 質量規格:>98%,BR免疫球蛋白E Fc段受體Ⅱ試劑盒連翹酯苷B;Forsythoside B
萊氏野村菌Nomuraea│rileyi (Farl.) Samson 質量規格:含量測定免疫球蛋白E Fc段受體Ⅰ試劑盒連翹酯苷A;Forsythoside A
球孢白僵菌Beauveria│bassiana (Bals.-Criv.) Vuill. 質量規格:>96%,CP,BR免疫球蛋白D試劑盒辣椒素;Capsaicin
嗜熱紅短芽孢桿菌Brevibacillus│thermoruber 質量規格:HPLC>98%,標準品免疫球蛋白A試劑盒連翹苷;Forsythin
陰溝腸桿菌Enterobacter│cloacae 質量規格:>98.5%,BR免疫球蛋白A Fc段受體Ⅰ試劑盒魯斯可皂苷元;Ruscogenin
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質量規格:HPLC>98%,標準品免疫核糖核酸試劑盒蘆薈苷;barbaloin
鏈霉菌屬Streptomyces│sp. 質量規格:>99%,BRelisa試劑盒綠原酸;Chlorogenic acid
孟氏假單胞菌Pseudomonas│mandelii 質量規格:HPLC≥98%,標準品錳超氧化物歧化酶試劑盒羅漢果苷ⅴ;Mogroside V
球孢白僵菌Beauveria│bassiana (Bals.-Criv.) Vuill. 質量規格:>99%,BR鎂依賴性磷酸酶1試劑盒龍膽苦苷;Gentiopicroside