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上海博湖生物科技有限公司
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原代細胞分離培養實驗流程
2024-11-18 閱讀(99)
原代細胞（Primary cells）：是指直接從機體取出的組織或細胞獲得單個細胞并在體外進行培養的細胞。原代細胞培養是指將組織從動物體內取出，經各種酶、螯合劑(常用EDTA) 或機械方法剪碎處理，分散成單細胞，在合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長和繁殖的過程。細胞的分離純化和細胞培養技術是細胞生物學實驗的基礎。我們通常把第一代至第十代以內的培養細胞統稱為原代細胞。
原代細胞分離培養實驗流程:
首先將組織從機體中取出，經yi 蛋白酶/膠原酶處理后分散成單細胞，再在合適的培養基中培養，使細胞繁殖到一定系數后進行細胞鑒定。
實驗流程:
1. 取材：將目標動物麻醉或處死，動物體上取出目標器官或組織。
2. 原代細胞的分離：獲取的組織或器官中含有血液和多種細胞，我們將獲取的組織或器官在無菌環境下充分剪碎，消化，分散成單細胞。根據目標細胞的特點選擇不同的篩選方法， 以獲得目標細胞。
3. 培養和鑒定：根據客戶的需求，爾丙生物將獲得的高純度原代細胞繼續培養或進行傳代培養，也可以凍存處理，滿足不同的實驗需求。
常用的原代培養法有組織塊培養法和消化培養法。許多實驗室喜歡用組織塊培養法進行原代培養，因為方法簡單，細胞也較容易生長。尤其是培養心肌，有時還可觀察到心肌組織塊搏動。細胞從組織塊邊緣向外長出并鋪滿培養皿或培養瓶后， 即可進行傳代。
下面介紹織塊培養法：
1. 操作步驟
（1）、在無菌條件下，取待培養的組織適量，置入小燒杯中， 以適量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉組織塊表面的血污。
（2）、用眼科剪將組織塊反復剪成0.5~ 1mm3的小塊。
（3）、再用Hanks 溶液反復漂洗， 直至液體不混濁為止。等組織塊下沉，將燒杯傾斜，用小吸管盡量吸除Hanks 溶液。
（4）、用含20%滅活血清及雙抗溶液(200U/ml 青霉su、200μg/ml 鏈霉su）的培養液再清洗，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培養液。
（5）、用彎頭吸管吸取組織小塊，均勻地置于培養皿內表面，吸去多余的培養液，各組織小塊之間相距0.5cm 為宜。蓋好培養皿蓋，做好標記， 置37°C 的CO2培養箱內。
（6）、2~4h 后，于超凈工作臺中，緩緩地向培養皿中加入上述含20％血清及雙抗溶液( 100U/ml 青霉su及100μg/ml 鏈霉su）的培養液少量，以使組織塊浸沒在培養液中。
（7）、輕輕地將培養皿及組織塊移至CO2 培養箱， 如無特殊情況，不必觀察。1~2 周后，可觀察到細胞從組織塊邊緣長出，形成生長暈。
（8）、 一般說來，若培養液無明顯改變， 1 周換液1 次即可。待細胞長滿整個培養皿內表面，即可進行傳代培養。
2. 注意事項
（1）、如果是用培養瓶而不是培養皿，則接種組織塊千培養瓶底壁后， 要輕輕地翻轉培養瓶，令瓶底在上，蓋好瓶蓋后輕輕置入37°C 的CO2 培養箱， 2~4h 后，取出培養瓶，在超凈工作臺內打開瓶蓋，仍令組織塊在上方。在組織塊對面瓶壁加入適量上述培養液。然后，輕輕翻轉培養瓶，讓組織塊浸沒于培養液中。蓋好瓶蓋后放回二氧化碳孵箱，繼續培養。
（2）、從培養皿表面游離下來的組織塊，棄去即可。
（3）、如果使用玻璃培養瓶，而不是新的塑料培養瓶，則最好在玻璃底表面包被大鼠鼠尾膠原，這樣不但有利于組織塊的黏附，而且可使細胞生長得更好。
（4）、本方法適于各種組織的培養，操作者還可根據自己的實驗需要和細胞種類加以修改。
