上海宇淳生物科技有限公司
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參考價 | ¥510 |
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型號
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質
經銷商 -
所在地
上海市
48T | 510元 | 1 盒 可售 |
更新時間:2024-05-29 10:17:35瀏覽次數:276
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胃蛋bai酶試劑盒,微板法
胃蛋bai酶試劑盒,微板法
本試劑盒僅供科研使用 1 胃*白酶(Pepsin)試劑盒說明書 (貨號:WS0121W 微板法 48 樣) 一、產品簡介: 胃*白酶(Pepsin)是一種消化性蛋白酶,由胃粘膜主細胞分泌,分解食物中蛋白 質成小肽段。一般用于神經性低酸癥的鑒別,慢性胃炎、慢性胃擴張、慢性十二指腸炎等 癥狀時也會引起胃*白酶分泌的減少。 胃*白酶可催化血紅蛋白水解生成含酚的氨基酸,含酚的氨基酸與福林酚反應后顯藍 色;其顏色的深淺與胃蛋*酶活性呈正比。 二、試劑盒組分與配制: 試劑名稱 規格 保存條件 備注 提取液 液體 50mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 5mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉體 mg×2 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使粉體落入底部,每瓶 再加 13mL 蒸餾水溶解備用。 試劑三 液體 15mL×1 瓶 4℃保存 試劑四 液體 3mL×1 瓶 4℃保存 標準品 粉體 mg×1 支 4℃保存 臨用前加 2mL 提取液,再用蒸餾水稀 釋 10 倍,即為 0.05mg/mL 酪*酸。 三、所需的儀器和用品: 酶標儀、96 孔板、臺式離心機、可調式移液器、天平、研缽、冰和蒸餾水。 四、胃*白酶活性測定: 1、樣本制備: ① 組織樣本: 取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液,進行冰浴勻漿。4℃×3500rpm 離心 5min,取上清, 置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例 進行提取 ② 液體樣本:液體用提取液按照 1:1 的比例混合稀釋后,4℃×3500rpm,離心 5min, 取上清液檢測。 2、上機檢測: ① 酶標儀預熱 30min 以上,調節波長至 680nm。 ② 所有試劑解凍至室溫。 ③ 在 EP 管中依次加入: 試劑名稱(μL) 測定管 對照管 樣本 50 50 試劑一 50本試劑盒僅供科研使用 2 37℃孵育 5min 試劑二 250 250 37℃孵育 10min 試劑一 50 37℃孵育 5min 后,3000rpm 離心 5min,上清液待測。 ④ 顯色反應,在 EP 管中: 試劑名稱(μL) 測定管 對照管 標準管 (僅做一次) 空白管 (僅做一次) 上清液 30 30 標準品 30 提取液 30 試劑三 150 150 150 150 試劑四 30 30 30 30 37℃孵育 20min 后(若渾濁則室溫 3000rpm 離心 5min),取 200μL 至 96 孔板中,于 680nm 處測定,讀取吸光值 A。ΔA=A 測定-A 對照(每個樣 本做一個自身對照)。 【注】1. 若ΔA 在零附近徘徊,可以延長反應時間 T(如 37℃孵育 10min 延長至 20min)或增加樣本 量 V1(如增至 100μL,則試劑二相應減少),則改變后的反應時間 T 和樣本量 V1 需代入計 算公式重新計算。 2. 若 A 測定值大于 1.5,可以減少樣本量 V1(如減至 20μL,用提取液相應補充),則改變后的 樣本量 V1 需代入計算公式重新計算。 五、結果計算: 1、按樣本蛋白濃度計算: 酶活定義:37℃每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成 1μg 酪*酸為 1 個酶活單位(U)。 胃*白酶(U/mg prot)=[ΔA÷(A 標準-A 空白)×C 標準×V2]÷ (V1×Cpr) ÷T =35×ΔA÷(A 標準-A 空白)÷Cpr 2、按樣本鮮重計算: 酶活定義:37℃每 g 組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成 1μg 酪*酸為 1 個酶活單位(U)。 胃*白酶(U/g 鮮重)=[ΔA÷(A 標準-A 空白)×C 標準×V2]÷(W×V1÷V) ÷T =35×ΔA÷(A 標準-A 空白)÷W 3、液體 LAP 活力的計算: 酶活定義:37℃每毫升液體每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μg酪*酸為1個酶活單位(U)。 胃蛋*酶(U/mL)=[ΔA÷(A 標準-A 空白)×C 標準×V2]÷V1×2÷T =70×ΔA÷(A 標準-A 空白) V---加入提取液體積,1 mL; V1---加入樣本體積,0.05mL; V2---第③歩反應總體積,0.35mL; T---反應時間,10min; C 標準---50μg/mL; W---樣本質量,g; Cpr---樣本蛋白質濃度,mg/mL;建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測試劑盒