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南京億迅生物科技有限公司
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| 參考價 | ￥ 600 | ￥ 450 |
| 訂貨量 | 1 件 | 5 件 |
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- 所在地 南京市
更新時間：2019-11-07 14:01:16瀏覽次數：589
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丙酮酸激酶(PK)檢測試劑盒
測定意義
PK（EC 2.7.1.40）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，催化糖酵解過程中的后一步反應，是糖酵解過程中的主要限速酶之一，也是產生ATP的關鍵酶之一，因此測定PK活性具有重要意義。
需自備的儀器和用品
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水
試劑的組成和配制
提取液：60mL×1瓶，4℃保存;
試劑一：液體45mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1支，-20℃保存；
試劑三：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前加入1.5mL雙蒸水充分溶解備用，用不完的試劑仍-20℃保存;
試劑四：液體×1支，4℃保存；臨用前每支加入900μL雙蒸水充分溶解備用，用不完的試劑仍4℃保存;
PK工作液的配制：臨用前將試劑二轉移至試劑一中，充分溶解待用。
樣本的前處理
1、細菌或細胞處理：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每200萬細菌或細胞加入400μL提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率200W，工作3s，間歇10s，工作35次），8000g，4℃，離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織處理：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進行冰浴勻漿；8000g ，4℃，離心10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟
試劑名稱(μL) | 測定管 |
PK工作液 | 900 |
試劑三 | 30 |
試劑四 | 15 |
混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴5min
樣本 | 30 |
將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中，加樣本的同時開始計時，在340nm波長下記錄20秒時的初始吸光度A1，比色后迅速將比色皿連同反應液一起放入37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴中準確反應2分鐘；迅速取出比色皿并擦干，340 nm下比色，記錄2分20秒時的吸光度A2，計算ΔA=A1-A2。
注意事項
1、測定過程中樣本和所有試劑在冰上放置，以免變性和失活。
2、比色皿中反應液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應過程中把比色皿連同反應液放在此燒杯中。
3、兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結果的準確性。
丙酮酸激酶(PK)檢測試劑盒
