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南京億迅生物科技有限公司
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| 參考價 | ￥ 2135 | ￥ 1600 |
| 訂貨量 | 1 件 | 5 件 |
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- 廠商性質 生產商
- 所在地 南京市
更新時間：2019-11-07 11:05:44瀏覽次數：848
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線粒體呼吸鏈復合體Ⅴ活性檢測試劑盒
測定原理
復合體Ⅴ水解ATP產生ADP和Pi，通過測定Pi增加速率來測定復合體Ⅴ活性。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
試劑一：25mL×1瓶，-20℃保存；
試劑二：25mL×1瓶，-20℃保存；
試劑三：1 mL×1瓶，-20℃保存；
試劑四：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前每支加入1.3mL雙蒸水，充分溶解備用，用不完的試劑仍-20℃保存;
試劑五：6mL×1瓶，4℃保存；
試劑六：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入3mL雙蒸水，充分混勻;
試劑七：粉劑×1瓶, 4℃保存；臨用前加入10mL雙蒸水，充分混勻;
試劑八：粉劑×1瓶, 4℃保存；臨用前加入10mL雙蒸水，充分混勻;
試劑九：液體10mL×1 瓶，室溫保存。
定磷試劑的配制：按H2O: 試劑七:試劑八:試劑九=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷試劑應為淺黃色。若無色則試劑失效，若是藍色則為磷污染（請根據需要，用多少配多少）。
注意：配試劑用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器，或者一次性塑料器皿，以避免磷污染。
復合體Ⅴ的提取
- 稱取約0.1g組織或收集500萬細胞，加入1.0 mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
- 4 ℃ 600 g離心5min。
- 將上清液移至另一離心管中，4 ℃ 11000 g離心10min。
- 上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的復合體Ⅴ（此步可選做，可以判斷線粒體提取效果）。
- 在沉淀中加入800uL試劑二和8uL 試劑三，超聲波破碎（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），用于復合體Ⅴ酶活性測定，并且用于蛋白含量測定。
測定步驟
1、酶促反應
試劑名稱（μL） | 對照管 | 測定管 |
試劑四 | 50 | 50 |
試劑五 | 200 | 200 |
樣品 |
| 250 |
混勻， 37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）準確水浴30min
試劑六 | 100 | 100 |
樣品 | 250 |
|
混勻，4000g，室溫離心10min，取上清液
2、定磷
上清液 | 250 | 250 |
定磷試劑 | 1250 | 1250 |
混勻，室溫靜置10min左右，在 660nm處用對照管調零，讀取測定管吸光值
線粒體呼吸鏈復合體Ⅴ活性檢測試劑盒
