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產品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
產品名稱:立克次體通用PCR檢測試劑盒
英文名稱:Rickettsia spp.PCR
編號:XG-P2027
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
包裝規格及成分:
編號 | 成分 | 十孔盒包裝(去紙托) |
試劑一 | 2×PCR MagicMix | 1mL(亮黃蓋) |
試劑二 | 源性成分 PCR 引物混合液 | 100 uL(白蓋) |
試劑三 | 源性成分 PCR 陽性對照 | 50 uL(黃蓋) |
試劑四 | 超純水 | 1 mL(本色蓋) |
試劑五 | DNA 釋放劑試用裝 | 50 次(成分見下) |
試劑六 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分一 | 50 uL(白蓋) |
試劑七 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分二 | 100uL(綠蓋) |
試劑八 | 免 DNA 提取試劑溶液 B | 400 uL(紅蓋) |
試劑九 | 使用手冊 | 400 uL(紅蓋) |
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸,繪制標準曲線
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
酚紅葡萄糖肉湯250g用于蠟樣芽孢桿菌葡萄糖分解試驗(SN標準)
結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA) Violet Red Bile Agar 用于大腸菌群的固體平板檢測(GB2008、SN標準)
紅指示劑盒 10ml*1 用于紅試驗配套試劑
葡萄糖肉湯250g/瓶用于溶血性鏈球菌增菌incubationmedia葡萄糖肉湯250g/瓶用于溶血性鏈球菌增菌
*麥康凱瓊脂添加劑 1ml*5 每200mlHB0121培養基中添加1支(含*0.01mg和亞碲酸鉀0.5mg)AntibioticAgar 進口分裝 超細高嶺土(6000(3.5um)) Kaolin(superfine) : 1332-58-7 質量規格: 6000(3.5um)
m-GREENYEASTandFUNGIBROTH 進口分裝 (光譜級,≥99.5%(GC)) Pyridine : 質量規格: 光譜級,≥99.5%(GC)
馬鈴薯-蔗糖培養基 進口分裝 化銫(用于高通量質譜,99.9995%) Cesium iodide : 7789-17-5 質量規格: 分析標準品,用于高通量質譜,99.9995%
面包酵母標準培養基 進口分裝 四己基銨(用于離子色譜,≥99.0%(T)) Tetrahexylammonium hydrogensulfate : 32503-34-7 質量規格: 用于離子色譜,≥99.0%(T)CD33 Others Mouse 小鼠 CD33 / Siglec-3 人細胞裂解液 (陽性對照)
人腦瘤細胞;SF126
MPC-83 胰腺腺泡細胞癌
IMR-32人神經母細胞瘤細胞 IMR-32 human neuroblastoma cells MEM培養基(GIBCO)+10%FBS
THPO Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 Thrombopoietin / THPO / TPO 蛋白 (His 標簽)
人上皮細胞;MCF-10A 人前列腺平滑肌細胞*培養基 100mL
立克次體通用PCR檢測試劑盒APT瓊脂250g用于乳酸菌分離培養
60g/L氯蛋白胨肉湯 60g%/L NaCl Peptone Water 用于副溶血性弧菌的前增菌培養(SN標準)
馬血清 Horse serum 200毫升 BR
GAM半固體培養基250g/瓶用于厭氧菌的保存,若需要,每培養基中可選擇性添加004和incubationmediaGAM半固體培養基250g/瓶用于厭氧菌的保存,若需要,每培養基中可選擇性添加004和1005
M-EndoMedium* 進口分裝 人庚肝抗體(HGVAb)ELISA試劑盒
* 進口分裝 人干擾素調節因子(IRF)ELISA試劑盒
氟達拉濱磷酸酯 進口分裝 人肺表面活性物質相關蛋白B(SP-B)ELISA試劑盒
草酸依地普侖/草酸* 進口分裝 人多藥耐藥相關蛋白(MRP)ELISA試劑盒JAM3 Others Human 人 JAM3 / JAM-C 人細胞裂解液 (陽性對照)
U-2 OS, 人骨肉瘤細胞
人支氣管上皮樣細胞;BEAS-2B
HKC細胞,人胚腎上皮細胞 大鼠肺泡巨噬細胞,NR8383細胞 CL-0381MDA-MB-175VII(人導管癌細胞)5×106cells/瓶×2
C918(人眼脈絡黑色素瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
HWP-c visceral 人類白前脂肪細胞(HWP)內臟 500,000cells 人腸微血管內皮細胞HIMEC
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