Amplite 熒光法通用型蛋白酶活性檢測試劑盒 返回列表頁

方案一：一個96孔板的測定方案

以下說明書僅提供指南，實際應根據您的具體需求進行修改。

概述

準備蛋白酶底物溶液（50μL）

加入底物對照，陽性對照或測試樣品（50μL）

孵育0分鐘（用于動力學讀數）或30分鐘-1小時（用于終點讀數）

在Ex / Em = 490 / 525nm處監測熒光強度

注意：在開始實驗之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分。

操作方法

1.準備工作解決方案：

1.1制備蛋白酶底物溶液：在2X測定緩沖液（組分C）中以1：100稀釋蛋白酶底物（組分A）。在96孔板中每次測定使用50μL蛋白酶底物溶液。

注意：2X分析緩沖液（組分C）設計用于檢測胰凝*蛋白酶，胰*白酶，嗜熱菌蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶XIV和人白細胞彈性蛋白酶的活性。對于其他蛋白酶，請參閱附錄I了解適當的分析緩沖液配方。

1.2胰*白酶稀釋：在去離子水中以1:50稀釋胰*白酶（5U /μL，組分B），得到濃度為0.1U /μL。

2.根據說明書中的表1和表2，將步驟1中制備的試劑加入96孔微量培養板中。

3.運行酶促反應：

3.1將50μL蛋白酶底物溶液（來自步驟1.1）加入到測定板中的所有孔中，充分混合試劑。

3.2用Ex / Em = 490 / 525nm的熒光板讀數器監測熒光增加。

對于動力學讀數：立即開始連續測量熒光強度，每5分鐘記錄數據30分鐘。

終點讀數：將反應在所需溫度下孵育30至60分鐘，避光，測量熒光強度。

方案二：使用純化酶篩選蛋白酶抑制劑

概述

準備蛋白酶底物溶液（10μL）添加底物對照，陽性對照，載體對照或測試樣品（90μL）

孵育0分鐘（用于動力學讀數）或30分鐘-1小時（用于終點讀數）

監測Ex的熒光強度 / Em = 490 / 525nm

操作方法

1.準備工作解決方案：

1.1制備1X測定緩沖液：將5mL去離子水加入5mL 2X測定緩沖液（組分C）中。

1.2制備蛋白酶底物溶液：在1X測定緩沖液（來自步驟1.1）中以1:20稀釋蛋白酶底物（組分A）。使用10μL/孔的蛋白酶底物溶液用于96孔板。

注意：2X測定緩沖液（組分C）設計用于檢測胰凝*蛋白酶，胰*白酶，嗜熱菌蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶XIV和人白細胞彈性蛋白酶的活性。 對于其他蛋白酶，請參閱附錄I了解適當的分析緩沖液配方。

1.3蛋白酶稀釋：將蛋白酶在1X測定緩沖液中稀釋至濃度為500-1000nM。每個孔需要10μL蛋白酶稀釋液。為所有測試樣品準備適當的量，并為陽性對照和載體對照孔準備額外的量。

2.根據說明書中的表1和表2，將步驟1中制備的試劑加入96孔微量培養板中。

3.運行酶促反應：

3.1將10μL蛋白酶底物溶液（來自步驟1.2）加入陽性對照（PC），載體對照（VC）和測試樣品（TS）的孔中。 充分混合試劑。

3.2用Ex / Em = 490 / 525nm的熒光板讀數器監測熒光強度。

對于動力學讀數：立即開始連續測量熒光強度，每5分鐘記錄數據30分鐘。

終點讀數：將反應在所需溫度下孵育30至60分鐘，避光。 然后測量熒光強度。